Imágenes de fluorescencia dual para identificar oligodendrocitos diferenciados

Tome un cultivo de células precursoras de oligodendrocitos (OPC), aisladas del cerebro de un cachorro de rata, que han sido inducidas a diferenciarse en oligodendrocitos. Las células se fijan para preservar la arquitectura celular.

Los oligodendrocitos diferenciados expresan la proteína básica de mielina, o MBP, un marcador de oligodendrocitos maduros, mientras que tanto las OPC como las células diferenciadas expresan el factor de transcripción de oligodendrocitos 2, u Olig2.

Aplicar una solución bloqueadora de la permeabilización e incubar con agitación, permeabilizando las membranas celulares y bloqueando los sitios de unión no específicos.

Agregue anticuerpos primarios dirigidos a los marcadores e incube con agitación para permitir la unión.

Lave para eliminar los anticuerpos no unidos, luego agregue diferentes anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos específicos para los anticuerpos primarios e incube con agitación.

Lave las células y luego colóquelas en un sistema de imágenes de fluorescencia dual.

Utilice la luz de longitudes de onda específicas para excitar los distintos fluoróforos y detectar las señales emitidas para visualizar los marcadores.

Identificar oligodendroci