JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 2:27 min • May 29th, 2025
Comience con un ratón anestesiado con encefalomielitis autoinmune experimental o EAE. Esta afección causa inflamación en los ojos y el cerebro.
Coloque el mouse en un aparato de imágenes, alineando la parte superior de la espalda en el centro.
Cubra la parte inferior del mouse con un paño negro para evitar interferencias de señal de esta región.
Utilice software de imágenes para registrar la posición del mouse.
Tome una jeringa llena de un reactivo que contenga el sustrato bioluminiscente e inyéctelo por vía intraperitoneal en el ratón.
El reactivo circula y entra en el sitio de la inflamación, donde el sustrato interactúa con enzimas específicas de la inflamación.
La reacción enzima-sustrato produce una señal bioluminiscente.
Capture imágenes a intervalos de tiempo regulares para monitorear esta señal.
El nervio óptico se encuentra cerca de la superficie, lo que hace que la bioluminiscencia alrededor de los ojos sea prominente. Por el contrario, las señales del cerebro son débiles ya que el cráneo absorbe la luz emitida.
En la imagen, el azul indica inflamación leve y el rojo indica inflamación severa.
Para realizar imágenes in vivo, mantenga a los ratones bajo anestesia con isoflurano del 2 al 2,5% durante todos los procedimientos de imagen. Coloque dos ratones uno al lado del otro en el aparato y coloque las espinas superiores de los ratones en el centro.
A continuación, proteja el sitio de inmunización con un paño negro. Abra el software para capturar imágenes e inicializar la cámara. Luego, tome una imagen de referencia para evaluar el posicionamiento correcto de los ratones.
Posteriormente, use el enfoque B con una distancia de 6,5 centímetros a la cámara para capturar todas las imágenes. Luego, mezcle el reactivo quimioluminiscente listo para usar a 40 miligramos por mililitro antes de llenar la jeringa. Luego, inyecte 100 microlitros en los ratones por vía intraperitoneal y capture las imágenes de bioluminiscencia 5, 10 y 15 minutos después de la inyección.