Obtención de imágenes de mitocondrias neuronales mediante un microscopio electrónico de barrido de cara de bloque en serie

0 vistas3:25 min • May 29th, 2025

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Tome una sección de tejido cerebral de ratón recortada e incrustada en resina que contiene el hipocampo.

La sección se tiñe con metales pesados para mejorar el contraste bajo un microscopio electrónico.

Monte la sección en un pasador de aluminio con pegamento de cianoacrilato.

Cubra los lados del bloque con pasta de plata coloidal para crear un camino conductor hacia el pasador de aluminio.

Examine el bloque de tejido con un microscopio electrónico de barrido de cara de bloque en serie (SBFSEM).

Dentro del SBFSEM, el ultramicrotomo corta secuencialmente el bloque en capas ultrafinas mientras un haz de electrones de bajo voltaje escanea la superficie expuesta.

Un detector de electrones retrodispersados captura imágenes 2D de alta resolución, revelando las mitocondrias y las estructuras celulares circundantes.

Usando el software adecuado, ajuste el brillo y el contraste para mejorar la claridad de la imagen.

Alinee las imágenes secuenciales para reconstruir un volumen 3D del tejido cerebral. Esta reconstrucción 3D permite un mapeo preciso de la morfología mitocondrial, la distribución espacial y sus relaciones dentro de los compartimentos neuronales.

Recorte las muestras en el área de interés y móntelas en un pasador de aluminio con superpegamento gelificante de cianoacrilato. Luego, cubra la muestra con pasta de plata coloidal alrededor de los lados del bloque para proporcionar un camino conductor hacia el pasador de aluminio. Examine las muestras de tejido utilizando un sistema de microscopio electrónico de barrido equipado con una platina de ultramicrotomo en la cámara y un detector de electrones retrodispersados de bajo kilovoltio.

Imagen de los ejemplos con esta configuración. Comience el análisis seleccionando el tipo de imagen, luego 8 bits para convertir las imágenes al formato TIFF de 8 bits desde el 16 bits patentado original. Si la conversión automática de contraste y/o brillo durante este paso no es ideal para las imágenes, vuelva a abrir las imágenes de 16 bits y presione imagen. Ajustar el contraste de brillo.

Seleccione un rango que funcione para todas las imágenes y presione Aplicar. A continuación, realice la conversión. Si hubo un movimiento de imagen inaceptable entre sectores, alinee las pilas de imágenes seleccionando Complementos, Registro y alineación de pila lineal con SIFT y establezca la alineación para el modo de solo traducción en lugar de cuerpo rígido.

Amplíe el tamaño del lienzo antes del registro seleccionando ajustar el tamaño del lienzo. Alternativamente, reduzca la imagen a un área de interés seleccionando la región deseada y luego recortándola. Si es necesario, escale las imágenes a un tamaño más pequeño y manejable usando la imagen j, luego seleccione la imagen y la escala.

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Última actualización: 1 agosto 2026