Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:33 min. • May 29th, 2025
Comience con un conjunto de perfusión colocado en la platina de un microscopio invertido.
El conjunto de perfusión contiene un nervio periférico disecado asegurado entre un cubreobjetos y un portaobjetos de microacueducto con perfusión salina continua.
Los axones mielinizados del nervio expresan los neurofilamentos verdes marcados con fluoróforos.
Usando iluminación de campo claro, concéntrese en los axones mielinizados.
Cambie al modo confocal, fotoblanquee con alta potencia láser y, a continuación, capture una imagen de referencia de baja autofluorescencia con baja potencia láser.
Dibuje líneas paralelas a lo largo del axón para definir la longitud de la ventana de fotoactivación. Utilícelo como guía para crear una región de activación rectangular.
Ilumine esta región con una longitud de onda específica para activar los neurofilamentos marcados con fluoróforos verdes, lo que hace que emitan fluorescencia. Adquiere la imagen.
Después de la activación, capture imágenes de lapso de tiempo.
Con el tiempo, los neurofilamentos fluorescentes se mueven en ambas direcciones y se extienden a las regiones flanqueantes adyacentes.
La aparición de fluorescencia en las regiones flanqueantes adyacentes
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