Ablación neuronal dirigida mediante microscopía de dos fotones en un pez cebra Larava

Comience con una larva de pez cebra transgénica anestesiada inmovilizada en agarosa y colocada en una placa de Petri que contenga una solución anestésica.

Colóquelo bajo un microscopio láser de dos fotones, que utiliza dos fotones para obtener imágenes detalladas.

Concéntrese en las capas superior e inferior del cerebro para establecer límites de imágenes.

Capture imágenes a varias profundidades para observar las neuronas antes del tratamiento con láser.

Ajuste el enfoque en la región de interés y ajuste el tamaño del marco para refinar el enfoque en las neuronas.

Seleccione e irradie las neuronas utilizando el láser de dos fotones.

El láser induce calor localizado, lo que resulta en la muerte neuronal con un daño mínimo al tejido circundante. Captura la imagen.

Compare las imágenes previas y posteriores al tratamiento para evaluar los cambios de fluorescencia.

Reenfocar las neuronas en planos más profundos y repetir la irradiación para tratar todas las neuronas en la región de interés.

Vuelva a capturar la imagen y compárela con la imagen de pretratamiento. La pérdida de fluorescencia después del tratamiento con láser confirma el éxito de la ablación neuronal.

Coloque la larva incrustada e