Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:58 min. • May 29th, 2025
Comience con un ratón anestesiado con una placa de cabeza asegurada sobre una ventana cortical de cráneo delgado preparada quirúrgicamente.
Coloque el ratón en posición supina. Retire la piel medial del muslo para exponer la vena femoral.
Inyecte un conjugado de colorante fluorescente en la vena para etiquetar el plasma sanguíneo, lo que permite la visualización de los vasos sanguíneos.
Sutura la incisión.
Voltee el mouse y asegure la placa de la cabeza en un arnés para estabilizar el mouse.
Transfiera la configuración a una platina de microscopio de dos fotones.
Agregue solución salina sobre la ventana cortical. Baje la lente del objetivo hasta que entre en contacto con la solución salina.
Usando iluminación de campo claro, ubique la región de imágenes.
Cambie a imágenes de dos fotones.
El láser del microscopio enfoca la luz infrarroja cercana de baja energía en el cerebro.
En el punto focal del láser, dos fotones combinan su energía para excitar el tinte, haciendo que los vasos sanguíneos sean fluorescentes.
Identifique un lecho capilar, una red de pequeños vasos sanguíneos que conectan las arterias con las venas, y amplíelo.
Adquirir imágenes para analizar la microvasculatura del cerebro.
En este procedimiento, retire la piel del muslo izquierdo medial del ratón. A continuación, localice la vena femoral. Con una jeringa de 1 mililitro y una aguja de calibre 30, extraiga 130 microlitros de la solución de tinte fluorescente. Inyecte 100 microlitros del tinte lentamente en la vena femoral.
Después de retirar la aguja, aplique una presión suave y constante en el lugar de la inyección para detener cualquier sangrado y deje que el tinte circule durante cinco minutos. Luego, cierre el sitio quirúrgico con suturas. Voltee con cuidado el mouse sobre su estómago y colóquelo en el arnés de la placa de la cabeza del mouse. Para imágenes de dos fotones in vivo, mueva el aparato quirúrgico al microscopio de dos fotones y asegúrese de mantener el nivel de anestesia del animal.
A continuación, coloque una pequeña cantidad de solución salina al 0,9% en el depósito de la placa de cabeza y baje el objetivo del microscopio para que entre en contacto con la solución salina. Luego, ubique el área de interés, utilizando el objetivo de visualización de campo claro. Luego, comience la obtención de imágenes de dos fotones. Localice un lecho capilar en la pantalla de visualización y amplíe esta área con el zoom óptico 2. Adquiera imágenes de los capilares utilizando el software de imágenes de dos fotones.