Imágenes de fluorescencia de la agregación de proteínas PolyQ en neuronas de Caenorhabditis elegans
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 5:36 min. • June 17th, 2025
Comience con gusanos Caenorhabditis elegans anestesiados, de la misma edad y deficientes en chaperonas.
Ambos grupos expresan proteínas poliQ marcadas con fluoróforos en sus neuronas que son propensas a plegarse incorrectamente.
En los gusanos de control, las proteínas chaperonas limitan la agregación de poliQ mal plegada, mientras que, en los gusanos deficientes en chaperonas, el poliQ mal plegado forma fácilmente agregados.
Coloque el portaobjetos de control en una platina de microscopio confocal para microscopía de imágenes de fluorescencia (FLIM).
Ilumine los gusanos con un láser pulsado.
El láser excita el fluoróforo, que emite un fotón a medida que regresa al estado fundamental.
FLIM mide la vida útil de la fluorescencia, la duración que el fluoróforo permanece en su estado excitado.
En los gusanos deficientes en chaperonas, la agregación polyQ agrupa fluoróforos, promoviendo la transferencia de energía entre fluoróforos adyacentes en lugar de la emisión de fotones, lo que reduce la vida útil de la fluorescencia.
El software FLIM procesa estas vidas para generar mapas codificados por colores, lo que permite la visualización de la agregación.
Una vida útil de fluorescencia reduc
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