Imágenes de lapso de tiempo de células de la corteza cerebral primarias de ratón transfectadas

Tome una placa de pocillos múltiples recubierta de polímero que contenga células embrionarias de la corteza cerebral primaria de ratón, como células progenitoras y neuronales. Las células progenitoras se transfectan para expresar proteínas fluorescentes para su etiquetado y seguimiento.

Transfiera la placa a la cámara de incubación precalentada de un microscopio de fluorescencia invertida para obtener un entorno de imagen estable.

Localice la posición de referencia en la placa para obtener ubicaciones de imágenes consistentes.

Seleccione múltiples campos de imágenes por pocillo con mayor aumento para maximizar la probabilidad de observar células transfectadas.

A intervalos regulares, capture simultáneamente imágenes de contraste de fase para revelar la morfología y la dinámica celular, e imágenes fluorescentes para monitorear la expresión de proteínas fluorescentes.

Compare imágenes fluorescentes y de contraste de fase de lapso de tiempo para rastrear la división y diferenciación de las células progenitoras en linajes neuronales.

Para obtener imágenes de las células transducidas por retrovirus, coloque la placa de cultivo de tejidos en una cámara de imágenes conectada a controladores de temperatura y dióxido de carbono para mantener las células en condiciones constantes de 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono.

Seleccione una posición en el eje XY para que sirva como punto cero y calibre el punto cero. Seleccione de 10 a 15 posiciones por pocillo para obtener imágenes con un aumento de 10 veces. Configure el software para adquirir imágenes de contraste de fase cada cinco minutos e imágenes de fluorescencia cada tres horas para disminuir la fototoxicidad. Verifique y ajuste el enfoque en las primeras tres horas del experimento, ya que puede cambiar mientras se equilibra la temperatura.