Imágenes ex vivo de la migración de células granulosas cerebelosas postnatales mediante macroscopía confocal

Comience con una rebanada cerebelosa obtenida de un cerebro de cachorro de rata postnatal en una placa de múltiples pocillos que contenga medios.

Retire el medio e incube la rebanada en una solución de colorante fluorescente citoplasmático para marcar las células granulares (GC).

Transfiera la rebanada a una membrana de inserto de transpozo y elimine el exceso de tinte.

Retire el inserto y llene el pocillo con medios. Luego, vuelva a colocar el inserto y agregue medios para cubrir el tejido.

Incube para permitir que el tejido se adhiera a la membrana del inserto.

Transfiera la placa a una incubadora conectada a un macroscopio confocal y coloque una cubierta de vidrio sobre la placa.

Establezca las condiciones de cultivo, incube aún más el tejido y luego comience a obtener imágenes.

Tras la iluminación láser, los GC etiquetados son fluorescentes.

Capture imágenes de lapso de tiempo para visualizar la migración radial de los GC a través de la capa molecular del cerebelo.

Utilizando un software de imágenes, analice la distancia migratoria de los GC.

Después de cortar la muestra, use una pipeta de bulbo blanco truncado para transferirla con un poco de HBSS a una placa de seis pocillos. Cargue h