Imágenes microendoscópicas de calcio en tiempo real en un ratón que se mueve libremente

Comience con un ratón anestesiado asegurado en un sistema de jaula móvil.

El ratón tiene una lente de índice de refracción de gradiente preimplantada dirigida a la amígdala del cerebro, donde las neuronas expresan una proteína fluorescente sensible al calcio.

La superficie de la lente está cubierta para protección.

Deje que el mouse se despierte, luego aplique el flujo de aire para una rotación de la jaula sin fricción.

Retire la cubierta de la lente y coloque un microscopio miniaturizado sobre el cerebro.

Encienda el LED del microscopio. Luego, alinee el microscopio para que la lente esté centrada en el campo de visión.

Capture la imagen de la lente y ajuste la posición del microscopio.

A medida que la jaula gira, los movimientos de las patas del ratón generan miedo, estimulando las neuronas de la amígdala.

Esto desencadena una afluencia de iones de calcio, que se unen a indicadores fluorescentes.

La luz LED excita estos indicadores unidos al calcio, lo que hace que emitan fluorescencia.

La lente de índice de refracción de gradiente captura y transmite eficientemente esta fluorescencia al microscopio.

Esto permite obtener imágenes de calcio en tiempo real de la actividad neuronal de la amígdala.

Para evaluar la calidad de la implantación de lentes GRIN, coloque una jaula de carbono debajo del ratón anestesiado en la barra de la cabeza de un sistema de jaula de casa móvil y encienda el flujo de aire para que la jaula se mueva libremente sin fricción. Utilice una pinza de microscopio y un manipulador estereotáxico para alinear verticalmente un microscopio miniaturizado con el marco, antes de bajar el microscopio hasta que la superficie de la lente GRIN implantada aparezca en el campo de visión de la imagen dentro del software. Alinee el centro de la lente GRIN implantada con el centro del campo de visión y capture la imagen de la superficie de la lente GRIN implantada. Luego, levante lentamente la lente del objetivo del microscopio mientras observa la imagen para detectar la aparición de células que expresan GCaMP.