Visualización del plexo coroideo cerebral de un ratón mediante microscopía electrónica de barrido

Tome el plexo coroides del cerebro de un ratón en una canasta de muestras.

El tejido, ubicado dentro de los ventrículos cerebrales, contiene una capa de células epiteliales con microvellosidades en su superficie apical.

Incubar el tejido en una solución fijadora para preservar su arquitectura celular.

Lavar con un tampón para eliminar el exceso de fijador y estabilizar el pH.

Incube el tejido con tetróxido de osmio que se une a los lípidos de la membrana celular, preservando la estabilidad de la membrana, luego enjuague el exceso de reactivo.

Deshidrate el tejido utilizando concentraciones crecientes de alcohol para evitar la distorsión del tejido durante la obtención de imágenes.

Seque el tejido, asegúrelo a un soporte de muestra recubierto de carbono y luego cúbralo con una capa conductora de platino.

Usando microscopía electrónica de barrido, enfoque un haz de electrones en la superficie. La capa de platino disipa los electrones, evitando la acumulación de carga y minimizando los artefactos de imagen.

Un detector captura los electrones retrodispersados desde la superficie, produciendo una imagen del tejido que exhibe células epiteliales con microvellosidades.

Para realizar la preparación de la muestra para SEM, transfiera el plexo coroideo recién aislado a una solución de fijación recién hecha e incube durante la noche a 4 grados centígrados. Una vez hecho esto, lave la muestra tres veces con 3 a 5 mililitros de tampón de cacodilato de sodio 0,1 molar durante cinco minutos cada uno.

Fije las muestras en 3 a 5 mililitros de tetróxido de osmio al 2% en tampón de cacodilato de sodio molar 0,1 molar durante 30 minutos. Luego lave las muestras tres veces durante cinco minutos cada una con 3 a 5 mililitros de agua ultrapura. A continuación, deshidrate las muestras en una serie creciente de concentraciones de alcohol etílico heladas con 15 minutos por solución de alcohol etílico. Utilice un secador de puntos críticos para secar la muestra correctamente. Coloque la muestra con cuidado en un soporte de muestra con una etiqueta de carbono y visualice las muestras del plexo coroideo usando SEM.