Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:18 min. • June 17th, 2025
Tome neuronas corticales primarias de roedores cultivadas en un plato con fondo de vidrio recubierto que contiene medios.
Estas células expresan una proteína asociada a la ELA codificada genéticamente y un biosensor de calcio.
Reemplace el medio con un tampón de cloruro bajo en potasio.
Incubar para mantener la actividad neuronal en reposo y los niveles basales de calcio.
Monte el plato en una platina de microscopio confocal y coloque el tubo de perfusión.
Usando iluminación de campo claro, concéntrese en las neuronas y luego cambie a imágenes de fluorescencia.
Usando el láser del microscopio, excite el biosensor y registre la emisión de fluorescencia para determinar los niveles de calcio intracelular de referencia.
A continuación, perfunda el plato con tampón con alto contenido de cloruro de potasio.
La alta concentración de potasio despolariza las neuronas, abriendo canales de calcio dependientes de voltaje en las terminales presinápticas. Esto permite la entrada de calcio, que inicia la actividad sináptica neuronal.
El aumento de calcio intracelular se une al biosensor, provocando un cambio conformacional que mejora la fluorescencia.
Continuar registrando la fluorescencia para medir los c
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