JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 2:55 min • June 17th, 2025
Tomemos un ratón transducido anestesiado implantado con una lente de índice de gradiente dirigida a la corteza prefrontal medial, donde las neuronas expresan indicadores de calcio codificados genéticamente.
Retire la tapa de la lente y limpie su superficie para una transmisión de luz clara.
Asegure el miniscopio al soporte de la lente.
Ajuste la posición del miniscopio para identificar el plano focal óptimo. Este ajuste garantiza una visualización clara de los cuerpos celulares neuronales.
Desconecte el cable y deje que el mouse se recupere.
Conecte el cable al miniscopio y transfiera el mouse a una cámara con una configuración de registro de comportamiento.
Durante las imágenes, el miniscopio emite luz para excitar los indicadores de calcio, que emiten fluorescencia tras la entrada de calcio intracelular.
La lente de índice de gradiente transmite estas señales ópticas desde los tejidos cerebrales profundos al miniscopio, lo que reduce la dispersión de la luz y permite la visualización en tiempo real de la actividad neuronal.
Procese la actividad transitoria de calcio registrada con observaciones conductuales para correlacionar la actividad neuronal con comportamientos específicos.
Después de anestesiar brevemente al ratón con isoflurano, afloje el tornillo de bloqueo en la base con un destornillador pequeño antes de quitar la tapa protectora y limpie la superficie de la lente GRIN con un hisopo de algodón empapado en acetona. Conecte el miniscopio al cable e inicie el software NewView para comenzar a identificar el mejor plano focal ajustando la posición del miniscopio en relación con la base apretando o aflojando ligeramente con la ayuda de pinzas romas. Una vez que se determine el mejor plano focal, apriete el tornillo de bloqueo antes de desconectar el cable y volver a colocar el mouse en su jaula de origen.
Active el software de la cámara de comportamiento para ver el campo de comportamiento del mouse a través de una función de transmisión en vivo. Ajuste manualmente el enfoque de la cámara superior. Seleccione Activar estroboscopio y marque Activar/desactivar activador y haga clic en el botón Grabar. A continuación, utilice examinar para seleccionar la ubicación donde se guardarán las grabaciones de comportamiento. Seleccione el formato de imagen deseado.
Acerque el ratón a la arena y conecte el miniscopio al cable conectado al sistema de adquisición de datos. Luego, coloca el ratón en el centro de la arena. En el software de la cámara de comportamiento, haga clic en Iniciar grabación.
En NewView, marque LED1, haga clic en Capturar y luego active los botones para comenzar a grabar. Esto permite registros simultáneos de imágenes de calcio y comportamiento del ratón. Presione Detener después de 3,000 cuadros y guarde los archivos.