Imágenes de bioluminiscencia para evaluar el crecimiento tumoral en un corte de cerebro de ratón organotípico

Tome una placa de varios pocillos que contenga un corte de cerebro de ratón organotípico con células tumorales. Estas células expresan la enzima luciferasa.

Levante el inserto para agregar solución de luciferina en el medio y mezcle bien. Vuelva a colocar el inserto en el pozo.

La luciferina ingresa a la célula tumoral y es oxidada por la luciferasa, emitiendo bioluminiscencia.

Coloque la placa dentro de la cámara de imágenes del sistema de imágenes in vivo, que puede capturar la bioluminiscencia emitida por la muestra.

Bloquee la cámara para evitar interferencias de luz externa.

Ajuste la configuración de la cámara para capturar un solo pocillo por imagen.

Mueva el escenario para colocar el pozo directamente debajo de la cámara.

Optimizar el tiempo de adquisición en función de la intensidad de la bioluminiscencia emitida.

Defina la forma del tumor y luego comience la obtención de imágenes de bioluminiscencia.

Cuantificar la señal bioluminiscente para evaluar el crecimiento tumoral en el corte del cerebro.

Pipetee 5 microlitros de 30 miligramos por mililitro de solución de luciferina en el medio debajo de los insertos dentro de una campana estéril. Coloque la placa de seis pocillos con la tapa dentro de la cámara de imágenes del instrumento debajo de la cámara estacionaria y cierre la puerta de la cámara.

Abra el software e inicialice el instrumento. Después de elegir la configuración de la cámara, que permite la visualización y captura de un solo pocillo por imagen, coloque el pocillo que se va a fotografiar directamente debajo de la cámara. Use la herramienta ROI, ajústela alrededor de la forma y el tamaño del tumor. Mida el ROI e informe las lecturas totales para cuantificar la señal bioluminiscente de cada tumor en el corte.