JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 2:23 min • June 17th, 2025
Tome un cocultivo de glía de envoltura olfativa humana inmortalizada, o células OEG, y neuronas ganglionares de retina de rata axotomizadas, o RGN, en un cubreobjetos.
Las células OEG exhiben propiedades neurorregenerativas que facilitan la regeneración axonal en RGN.
Los RGN están inmunomarcados para que sus somas, o cuerpos celulares, emitan fluorescencia roja mientras que sus axones fluorescentes son verdes.
Con el medio de montaje, monte el cubreobjetos que contiene las celdas.
Utilice un microscopio de epifluorescencia para capturar múltiples imágenes de RGN.
Abra una imagen en el software de imágenes.
Cuantificar el porcentaje de neuronas con los axones en relación con el número total de RGN.
A continuación, trace un axón desde el soma hasta el final y comience el seguimiento de axones para determinar las longitudes de todos los axones.
Cuantifique el índice de regeneración axonal dividiendo la suma de todas las longitudes axonales por el número total de RGN.
Monte los cubreobjetos con medio de montaje y manténgalos a 4 grados centígrados. Utilice un objetivo de 40 veces de un microscopio de epifluorescencia para cuantificar la regeneración axonal. Cuantificar el porcentaje de neuronas con axones en relación con la población total de neuronas ganglionares de la retina.
Utilice el complemento NeuronJ en ImageJ para cuantificar el índice de regeneración axonal, o longitud axonal media, que es la suma de las longitudes de todos los axones identificados dividida por el número total de neuronas contadas, ya sea que presenten un axón o no. Después de abrir la imagen, haga clic en Analizar y establezca la escala de acuerdo con la configuración del microscopio, trabajando en píxeles por micrómetro. Seleccione Agregar trazados para comenzar el seguimiento de axones y, a continuación, realice un seguimiento de los axones desde el soma hasta el final. Haga clic en Medir trazados, mostrar medidas de trazado y Ejecutar.