JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 3:06 min • August 7th, 2025
Tome un tubo de microcentrífuga que contenga factor de crecimiento nervioso o NGF, una proteína neurotrófica, y protamina, una proteína transportadora cargada positivamente.
Complejos de protamina con NGF a través de interacciones electrostáticas que facilitan la encapsulación y evitan la degradación.
A un vial de vidrio, agregue etanol que contenga excipientes lipídicos que imiten la composición lipídica de las lipoproteínas de alta densidad o HDL para la formación de nanopartículas.
Mezclar con etanol adicional para una dispersión uniforme. Evapore el etanol bajo nitrógeno para formar una fina película lipídica.
Agregue agua ultrapura y homogeneice a alta velocidad para permitir el autoensamblaje en nanopartículas prototipo que imitan el HDL.
Introduzca el complejo NGF-protamina en las nanopartículas e incube mientras agita para promover la encapsulación de NGF-protamina mientras preserva su bioactividad.
Enfríe la suspensión para la estabilización de nanopartículas, luego agregue apolipoproteína A-I, la proteína estructural principal de HDL, y continúe revolviendo para integrar la proteína en la estructura de nanopartículas.
Estas nanopartículas que imitan el HDL cargadas con NGF ya están listas para nuevos estudios.
Para comenzar, mezcle 10 microlitros de NGF con 10 microlitros de protamina USP en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros y déjelo reposar durante 10 minutos a temperatura ambiente para formar el complejo. A continuación, agregue 59 microlitros de fosfatidilcolina y 11 microlitros de esfingomielina a un vial de vidrio.
También agregue 4 microlitros de fosfatidilserina, 15 microlitros de oleato de colesterol y 45 microlitros de succinato de tocoferol polietilenglicol. Mezcle y evapore el etanol bajo una suave corriente de nitrógeno durante unos cinco minutos. Todos los excipientes deben formar una película delgada y aceitosa en el fondo del vial de vidrio.
Agregue 1 mililitro de agua ultrapura al vial y homogeneice a 9,500 RPM durante 5 minutos a temperatura ambiente para formar el prototipo de nanopartículas o NP. Luego, agregue el complejo preparado a las NP prototipo. Incube la suspensión a 37 grados centígrados durante 30 minutos, agitando, usando una pequeña barra de agitación en el vial de vidrio.
Enfríe los MPs revolviendo a temperatura ambiente durante otros 30 minutos. Después de enfriar, agregue 106 microlitros de apolipoproteína A-I y revuelva a temperatura ambiente durante la noche para formar el NGF HDL final que imita a los NP.