Administración intratecal de un compuesto de prueba al sistema nervioso central de la rata

Comience con una rata anestesiada con una cánula guía implantada en el canal espinal lumbar.

Inserte un conjunto de catéter-alambre a través de la cánula guía en ángulo hacia el espacio intratecal, donde circula el líquido cefalorraquídeo o LCR.

Retire la cánula guía y avance lentamente el catéter más profundamente.

Luego, retire el cable por completo y conecte el catéter a un sistema de administración.

Inyecte solución salina estéril en el canal espinal, asegurando un paso despejado.

Administre lentamente una solución compuesta de prueba en el LCR, seguida de un lavado con solución salina estéril.

Separe el sistema de administración, corte el catéter y selle térmicamente su extremo.

Sutura el catéter termosellado al tejido conectivo y luego cierra la piel sobre el catéter. Limpia el sitio y deja que la rata se recupere.

El compuesto de prueba se propaga a través del LCR a la médula espinal y el cerebro, que comprenden el sistema nervioso central o SNC.

Dentro del SNC, ingresa a las neuronas y ofrece potencial terapéutico.

Para la colocación del catéter y la inyección del compuesto, identifique los dos hoyos naturales entre los músculos por encima de la pelvis afeitada. Y con una mano sosteniendo los hoyos, use la otra mano para presionar suavemente y sentir la columna vertebral desde la dirección caudal hasta la rostral para ubicar la primera hendidura importante entre las vértebras. Después de identificar el espacio intervertebral entre las vértebras S1 y L6, muévase ligeramente rostralmente para identificar el espacio intervertebral entre las vértebras L5 y L6.

Use un bisturí para hacer una incisión de no más de 2 centímetros de largo en la piel y la cápsula muscular en este sitio, a lo largo de la línea media desde la dirección rostral hasta la caudal, de modo que el sitio de la inyección esté en el centro de la incisión. Use tijeras de disección para diseccionar el tejido conectivo hasta que se pueda visualizar la capa muscular. Realizar una incisión de 1 centímetro en la cápsula muscular, inmediatamente lateral a la apófisis espinal dorsal de la vértebra lumbar L6.

Coloque el conjunto de la aguja de la cánula guía cerca de la cara anterior de la sexta vértebra lumbar y empuje el conjunto hacia el espacio intervertebral a lo largo de la cara anterior de la sexta vértebra, de modo que el extremo de la aguja penetre en el canal espinal.

Use fórceps romos para localizar los procesos espinales dorsales de la vértebra lumbar L6. Luego empuje la aguja a lo largo de la cara anterior de la sexta vértebra hacia el espacio intervertebral.

Empuje la cánula guía en su lugar a lo largo de la aguja. Retire la aguja e inserte el conjunto de alambre del catéter en la cánula guía. Inclinando el catéter en un ángulo de aproximadamente 45 grados con respecto al canal espinal, fuerce el extremo del catéter aproximadamente 0,3 centímetros hacia el canal.

Retire el alambre del estilete aproximadamente a 2,5 centímetros de la punta intratecal del catéter y avance el catéter hacia el canal espinal hasta que la marca de 2 centímetros en el catéter sea visible debajo del músculo. Cuando el catéter esté en su lugar, retire la cánula guía para dejar el catéter y el alambre del estilete en su lugar.

Avance el catéter hacia el canal espinal hasta que la marca de 2 centímetros esté en la entrada del canal y retire completamente el alambre del estilete. Se puede visualizar el líquido cefalorraquídeo que ingresa al catéter implantado. Luego, conecte el conjunto del catéter de administración al extremo distal del catéter implantado a través del extremo de la aguja de calibre 30.

A continuación, cargue 60 microlitros de solución salina estéril en una jeringa de 100 microlitros y cargue un bolo de 30 microlitros del compuesto de prueba en una segunda jeringa. Conecte la jeringa de solución salina al extremo del adaptador de tubo del conjunto del catéter de administración y enjuague 20 microlitros de solución salina estéril en el espacio intratecal.

Cuando se haya enjuagado toda la solución salina, reemplace la jeringa de solución salina con la jeringa cargada en bolo e inyecte 30 microlitros del compuesto de prueba en el espacio intratecal durante un período de 30 segundos. Cuando se haya administrado todo el bolo, reemplace la jeringa cargada en bolo con otra jeringa cargada con solución salina y enjuague el catéter con 40 microlitros adicionales de solución salina.

Cuando se haya administrado el segundo volumen de solución salina, separe el conjunto del catéter de administración del catéter implantado y use un par de pinzas de disección esterilizadas con perlas muy calientes para sujetar el tubo para cortar y sellar térmicamente el catéter implantado de forma aséptica. Use suturas de monofilamento absorbibles para asegurar el catéter termosellado al tejido conectivo y luego use suturas no absorbibles para cerrar la piel. Luego use gasa y solución salina para lavar la sangre de la piel y coloque a la rata en una incubadora caliente con monitoreo hasta que esté completamente recostada.