Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:33 min. • August 7th, 2025
Tome un cultivo de células de neuroblastoma en una placa multipocillo con medios.
Reemplace los medios en los pocillos con medios neuronales libres de glucosa para inducir estrés oxidativo.
Coloque la placa debajo de la boquilla de chorro de plasma a una distancia óptima para una exposición uniforme.
Trate los pozos seleccionados con una dosis baja de chorro de plasma a presión atmosférica (APPJ) a base de helio, que genera niveles controlados de especies reactivas de oxígeno y nitrógeno.
Incubar las células para permitir la activación de las vías de respuesta al estrés y la regulación positiva de las enzimas antioxidantes en los pozos tratados con APPJ.
Las células en pozos no tratados bajo privación de glucosa sufren un daño celular oxidativo adicional.
Agregue el reactivo del ensayo de viabilidad celular e incube. Las células viables reducen el reactivo a un producto coloreado.
Mida la intensidad del color con un lector de microplacas.
Los pocillos tratados con APPJ exhiben una mayor intensidad de color debido a una mayor viabilidad celular, mientras que los pocillos no tratados muestran una menor intensidad, lo que confirma el efecto neuroprotector de APPJ bajo privación de glucosa.
Ajuste la distancia entre la boquilla del tubo de cuarzo y la plataforma donde se colocará la placa de 96 pocillos a tres centímetros para asegurarse de que el haz pueda tocar la superficie del medio de cultivo. Antes del tratamiento, cambie el medio de cultivo en cada pocillo a RPMI 1640 sin medio de glucosa. Ahora, coloque la placa debajo de la boquilla de chorro de plasma a presión atmosférica. Luego, trate las células en pocillos separados durante 0, 1, 2, 4, 8 y 12 segundos.
Después del tratamiento, incube las células durante una hora en una incubadora de células a 37 grados centígrados, luego de la incubación a 10 microlitros de solución del kit de recuento de células 8 en cada pocillo. Luego, incube las células a 37 grados centígrados durante cuatro horas. Finalmente, mida la absorbancia a 450 nanómetros con un lector de microplacas.