Imágenes in vivo de las respuestas de las neuronas ganglionares geniculadas mediante microscopía epifluorescente

Comience con un ratón anestesiado con un ganglio geniculado expuesto quirúrgicamente, un grupo de neuronas periféricas que procesan el gusto.

Estas neuronas expresan GCaMP, un indicador de calcio que emite fluorescencia al unirse al calcio.

Elimine cualquier líquido que cubra el ganglio para una visualización clara.

Coloque el ratón en una almohadilla absorbente bajo un microscopio y localice el ganglio geniculado utilizando puntos de referencia anatómicos.

Usando un filtro apropiado en el endoscopio de epifluorescencia, detecte la fluorescencia verde de las neuronas que expresan GCaMP.

A continuación, inserte una aguja dispensadora conectada al tubo de administración del sabroso en la boca del ratón y administre el sabor.

El saborizante estimula las células receptoras del gusto, liberando ATP, que se une a los receptores de las neuronas ganglionares, desencadenando la afluencia de calcio.

Estos iones de calcio se unen a los GCaMPs, induciendo la emisión de fluorescencia.

Alinee la cámara con el campo de visión del microscopio y sincronice la grabación de video con la entrega de saboreo para capturar la actividad neuronal en tiempo real a través de cambios de fluorescencia.

Para ejecutar el panel de sabor, use succión para eliminar el líquido de encima del geniculado y coloque el mouse sobre una almohadilla absorbente bajo un microscopio de disección. Use el orificio que queda en la bulla, el orificio en el hueso temporal y el séptimo nervio para ubicar el ganglio geniculado. Y use el filtro FITC/GFP en el endoscopio de epifluorescencia para verificar si hay neuronas ganglionares geniculadas que expresan GCaMP individuales. Coloque la aguja dispensadora para una línea de sabor firmemente en la boca del animal. Sincronice el inicio de la grabación de video con el inicio de la presentación de sabor, viendo la transmisión en vivo para obtener respuestas.