Análisis de la morfología dendrítica en capas y columnas de Drosophila Medulla

Comience con un cerebro de Drosophila eliminado con glicerol en medios de montaje antidecoloración.

El cerebro contiene neuronas de médula dispuestas en capas, que organizan conexiones sinápticas, y columnas, que coordinan circuitos neuronales.

Algunas de estas neuronas están marcadas con marcadores fluorescentes verdes, en contraste con los axones fotorreceptores fluorescentes rojos.

Coloque el cerebro con el lado ventral hacia arriba. Coloque un cubreobjetos con pequeños parches de arcilla a los lados para evitar aplastar la muestra cerebral.

Bajo un microscopio, obtenga la pila de imágenes de vista horizontal, que contiene la neurona etiquetada en verde.

Retire el cubreobjetos y vuelva a colocar el cerebro, con la parte anterior hacia arriba.

Capture una pila de imágenes de la vista frontal de la misma neurona.

Usando el software, combine estas imágenes, elimine el canal fotorreceptor y visualice la imagen 3D de la neurona.

Trace el axón y luego las dendritas, siguiendo cada rama hasta su terminación, para mapear la organización dendrítica a través de las capas y columnas de la médula.

Para montar el cerebro en orientación horizontal, transfiera un cerebro limpiado de glicerol a una got