Aislamiento y purificación de glicoproteínas de oligodendrocitos de mielina recombinante
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:59 min. • August 7th, 2025
MOGtag es una glicoproteína de oligodendrocitos de mielina recombinante fusionada con etiquetas de solubilización y purificación para estudios experimentales de encefalomielitis autoinmune.
Para aislar MOGtag, suspenda las células bacterianas que expresan MOGtag en un tampón de lisis e incube.
Las enzimas y detergentes en el tampón alteran los lípidos de la membrana y degradan la pared celular.
Sonicar para lisar aún más las células, liberando cuerpos de inclusión insolubles que contienen MOGtag.
Centrífuga para peletizar los cuerpos de inclusión. Deseche el sobrenadante, vuelva a suspender el gránulo en tampón e incube.
Agregue clorhidrato de guanidina, luego incube para solubilizar MOGtag.
Transfiera las proteínas solubles a una resina de níquel cargada, mezcle e incube agitando para permitir que MOGtag se una a los iones de níquel.
Centrífuga para peletizar la etiqueta MOG unida. Retire el sobrenadante, vuelva a suspender el sedimento en un tampón de elución e incube agitando.
El imidazol en el tampón de elución libera MOGtag de la resina.
Centrifugar nuevamente, recolectar el sobrenadante purificado que contiene MOGtag y almacenarlo para su posterior análisis.
Distribuya los cultivos un
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