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Neurociencia
0 vistas • 2:25 min • August 7th, 2025
Tome un microinyector con una microaguja que contenga un vector viral HiRet de transporte retrógrado altamente eficiente.
Las glicoproteínas en la envoltura del virus HiRet facilitan su entrada en las neuronas a través de las sinapsis. El virus también porta un gen que codifica una proteína fluorescente.
Tome una rata anestesiada con una médula espinal lumbar expuesta 1 a 4.
Usando la línea media de la médula espinal como referencia, coloque la aguja sobre el lugar de la inyección.
Baje la aguja hacia la médula espinal.
Comience a administrar el virus a un ritmo controlado.
Deje suficiente tiempo para la difusión viral antes de retirar la aguja.
Los receptores neuronales se unen a las glicoproteínas virales, facilitando la entrada del virus a través de la sinapsis y el transporte a través del axón hasta el soma, un proceso llamado transporte retrógrado.
El gen viral se integra con el genoma del huésped, lo que permite la expresión de proteínas fluorescentes.
Estos virus también viajan a través de neuronas conectadas, lo que permite el seguimiento de las vías neuronales.
Coloque la aguja en la línea media de la médula espinal y use la escala Vernier en el micromanipulador para dirigir la aguja lateralmente 0,8 milímetros. Luego baje la aguja a la médula espinal hasta que se hunda, pero no perfore la duramadre. Y use un movimiento de torsión rápido para perforar la duramadre con la aguja hasta que la punta de la aguja se haya hundido a una profundidad de 1,5 milímetros.
Una vez que la aguja esté en su lugar, programe el inyector para administrar el virus a una velocidad de 400 nanolitros por minuto y confirme que el virus está ingresando a la médula espinal observando el progreso del frente de tinte. Una vez finalizada la inyección, deje que la aguja descanse en la médula espinal durante dos a cinco minutos para facilitar la difusión del virus, antes de retirar lentamente la aguja para colocarla en el siguiente lugar de inyección.