Administración de sustancias dirigidas al cerebro del ratón mediante infusión en la arteria carótida interna

Tome un ratón anestesiado con una arteria carótida común expuesta o CCA, que se bifurca en la arteria carótida externa o ECA y la arteria carótida interna o ICA.

Sutura firmemente el ECA distal, coloca un nudo suelto cerca de la bifurcación, luego corta el CCA y el ICA para restringir el flujo sanguíneo.

Hacer una incisión en el ACE y, a continuación, introducir un capilar conectado a una jeringa que contenga la sustancia problema.

Avance el capilar entre la bifurcación y el clip CCA, luego asegúrelo apretando el nudo ECA proximal.

Retire el clip ICA e infunda la sustancia para su administración dirigida al cerebro sin pasar por la circulación sistémica.

La sustancia atraviesa la barrera hematoencefálica para llegar al parénquima cerebral.

Una vez que el ECA y el ICA estén expuestos, use fórceps para colocar un segmento de sutura de nailon de 1 centímetro debajo de la arteria carótida externa, luego coloque un segundo segmento de 1 centímetro. Luego haga un nudo permanente en el punto más alto posible de la ECA.

En el punto más bajo posible del ECA inmediatamente por encima de la bifurcación CCA, haga un nudo extraíble más suelto. Luego use clips de vaso para cerrar el CCA en el punto más bajo posible y para cerrar el ICA.

Cerrar adecuadamente la arteria carótida interna antes de hacer un pequeño corte en la arteria carótida externa evitará el sangrado.

Ahora, con unas tijeras de resorte de microdisección, haga un corte de 2 milímetros en el ECA entre los dos nudos.

Es importante mantener el corte pequeño, ya que un corte grande provocará fugas de la sustancia que se va a infundir.

Ensamble el sistema de infusión conectando 6 pulgadas de tubo capilar a una jeringa de tuberculina que contenga 250 microlitros de la sustancia a infundir. Luego, inserte suavemente la punta del tubo capilar en la incisión en el ECA. Sigue avanzando la punta hasta que llegue a la mitad entre la bifurcación y el clip en el CCA.

Ate el nudo ECA inferior. Verifique que el nudo esté lo suficientemente suelto para permitir la fluidez capilar y lo suficientemente apretado para evitar fugas. Luego, retire el clip del ICA. Aplique presión suavemente al pistón de la jeringa, permitiendo la infusión de sustancias a aproximadamente 10 microlitros por segundo.

Después de la perfusión de la sustancia problema, vuelva a colocar el clip en el ICA. Retire suavemente el tubo capilar y luego ate completamente el nudo ECA inferior. Retire el clip del ICA y el CCA. Luego retire el retractor o los ganchos de tejido y la almohada.

Limpie el área a suturar con solución salina estéril y luego cierre la incisión con suturas de nailon. Después de administrar un agente antiinflamatorio y analgésico aprobado para aliviar las molestias postoperatorias, coloque al animal en una jaula sobre una almohadilla térmica durante al menos una hora y controle la recuperación.