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Comience con un cachorro de ratón receptor anestesiado. Asegure su cabeza con cinta adhesiva, asegurándose de que el cráneo permanezca expuesto.
Utilice la lambda de referencia anatómica para localizar la región cerebral objetivo.
Coloque una micropipeta sobre la región diana, cargada con una suspensión de células precursoras de interneuronas capaces de diferenciarse en interneuronas maduras.
Estas células precursoras se derivan de la corteza, el cuerpo estriado o el hipocampo de un cachorro donante en la misma etapa de desarrollo que el receptor.
Inyecte la suspensión en el cerebro para realizar un trasplante homotópico, en el que los precursores se administran en su región de origen, o un trasplante heterotópico, donde se introducen en una región cerebral diferente.
Deje que la suspensión se difunda antes de retraer la micropipeta para evitar el reflujo.
Transfiera al cachorro a una almohadilla térmica para su recuperación.
Ahora se puede evaluar la supervivencia y maduración de los precursores del donante en el cerebro del cachorro receptor.
Cargue una micropipeta de punta fina con aceite mineral. Conecte la micropipeta a un inyector de nanolitros y asegure el aparato de inyección de nanolitros a un manipulador conectado a una base magnética. Mientras se anestesia al primer cachorro con hielo, pipetee la solución celular varias veces para garantizar una distribución celular homogénea.
Expulse el aceite mineral y llene completamente la pipeta con la suspensión unicelular. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco de los dedos de los pies, coloque al cachorro en una cubierta de placa de Petri con la cabeza apoyada sobre masilla adhesiva para que la parte superior de la cabeza quede relativamente plana.
Cubra la cabeza con un trozo de cinta de laboratorio con un orificio de diamante, tirando de la cinta tensa hasta que la piel se estire para que la cabeza quede firmemente asegurada y la lambda sea visible a través del orificio. Mueva el cachorro asegurado debajo del inyector de nanolitros y baje la micropipeta para que la punta quede directamente sobre lambda.
Observe las coordenadas x, y en el manipulador y ajuste las perillas del manipulador hasta que la micropipeta se coloque en las coordenadas apropiadas a lo largo de los ejes mediolateral y anteroposterior de la cabeza. Baje la micropipeta hasta que la punta cree una pequeña concavidad en la piel y gire la perilla del manipulador del eje z con firmeza pero con suavidad para conducir la micropipeta a través de la piel y el cráneo hacia el cerebro.
Retraiga ligeramente la micropipeta hasta que la punta esté rodeada por un cono de piel, en forma de tienda de campaña, y vea las coordenadas a lo largo del eje z. Luego baje la micropipeta a la profundidad experimental adecuada e inyecte las células. Espere 15 segundos después de que se hayan administrado las células antes de retraer la micropipeta y repita la inyección en una segunda ubicación si lo desea. Coloque al cachorro en una almohadilla térmica y monitoree hasta que se logre la recuperación completa antes de transferirlo de regreso a la jaula de su casa.