Transfección mediada por electroporación de ganglios de la raíz dorsal de ratón para promover la regeneración sensorial de axones

Tomemos un ratón anestesiado con ganglios de la raíz dorsal L4 y L5 expuestos que contienen cuerpos celulares de neuronas sensoriales.

Cargue una pipeta de microinyección con construcciones de ARN marcadas con fluoróforo que regulan la regeneración de axones y un colorante trazador.

Inyecte la mezcla en los DRG.

Usando electrodos de electroporación, aplique pulsos eléctricos a los DRG.

Esto interrumpe las membranas de los cuerpos celulares de las neuronas sensoriales, creando poros que permiten que las construcciones entren en el citoplasma, facilitando la transfección.

Sutura la incisión y deja que el ratón se recupere.

Después de unos días, vuelva a anestesiar y asegure el ratón.

Haga una incisión lateral a la línea media a la izquierda. Diseccionar los músculos para exponer el nervio ciático.

Aplastar el nervio para dañar los axones de las neuronas sensoriales. Marque el sitio con un nudo de sutura.

Sutura la incisión y deja que el ratón se recupere.

Las construcciones transfectadas se dirigen a los ARNm en los cuerpos celulares de las neuronas sensoriales DRG, modulando transitoriamente la producción de proteínas para mejorar la regeneración sensorial de los axones después de la lesión.