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Neurociencia
0 vistas • 3:33 min • June 17th, 2025
Llene una jeringa con una solución que contenga virus adenoasociados, o AAV, y lidocaína, un anestésico local.
Coloque un ratón despierto en posición prona y cubra la parte superior de su cuerpo.
Sostenga la cintura pélvica del ratón y afeite la parte inferior de la espalda para exponer la piel. Esterilícelo con yodo y etanol.
Localice el espacio en la parte inferior de la columna vertebral y presione suavemente para marcarlo.
Gire la cola para alinear la columna vertebral e inserte la jeringa verticalmente.
Ajuste el ángulo hasta que se produzca un movimiento de cola, confirmando la entrada de la aguja en el espacio intratecal donde fluye el líquido cefalorraquídeo o LCR.
Inyecte lentamente la solución para una distribución uniforme.
Las partículas virales se unen a las neuronas, entran en el interior y liberan su material genético en el núcleo, lo que permite la expresión génica dirigida.
La lidocaína bloquea temporalmente las señales nerviosas, causando parálisis de la pierna a corto plazo, lo que confirma el éxito de la administración en el LCR.
Este protocolo establece la administración intratecal como un método eficaz para tratar enfermedades del SNC.
Antes de comenzar el procedimiento, conecte una aguja de calibre 27 a una jeringa Hamilton de 25 microlitros y alinee la punta biselada de la aguja con la escala volumétrica de la jeringa, luego cargue con cuidado 8 microlitros de 4 veces 10 a la décima copia del genoma de la solución del virus en la jeringa, teniendo cuidado de evitar burbujas.
A continuación, coloque un ratón despierto de 30 a 70 días, de 12 a 30 gramos, sobre una pieza de cama en posición prona con una capucha de bioseguridad y cubra la parte superior del cuerpo con una gasa estéril para calmar al ratón y evitar ser mordido. Sujete firmemente el ratón por la cintura pélvica, con el pulgar en un lado y el índice y el dedo medio en el otro lado, manteniendo tensa la piel entre las cinturas pélvicas bilaterales con el pulgar y el índice, luego afeite el pelaje entre las cinturas pélvicas bilaterales y esterilice la piel expuesta con un exfoliante a base de yoduro y etanol al 70%.
Para la administración intratecal directa de la solución de virus adenoasociado, palpe el espacio intervertebral a lo largo de la línea media entre las cinturas pélvicas bilaterales y use una uña para deprimir una hendidura en la piel para indicar el espacio intervertebral L5 a L6. Gire la base de la cola ligera y suavemente para revelar la línea media de la columna vertebral y ajuste el bisel de la aguja hacia la cabeza del animal. Con el mouse firmemente fijado en su posición, alinee la aguja a lo largo de la línea media de la columna e inserte la aguja suave y verticalmente en el centro de la hendidura, manteniendo la jeringa en un plano sagital central.
Cuando la aguja entre en contacto con el hueso, disminuya lentamente el ángulo a aproximadamente 30 grados y deslice la aguja en el espacio intervertebral. Un movimiento repentino de la cola es un signo de una entrada exitosa en el espacio intradural. Cuando la aguja entra en el espacio intervertebral, la punta se sentirá firmemente sujeta. Inyecte la solución vectorial y mantenga la aguja dentro del espacio intradural durante un minuto, luego retire lentamente la aguja con rotación para minimizar las fugas.