Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:35 min. • June 17th, 2025
Comience con un cultivo adherente de astrocitos primarios de ratón en un cubreobjetos dentro de una placa de cultivo.
Incubar con una sonda acidotrópica fluorescente que atraviesa las membranas celulares intactas para ingresar a los astrocitos.
La sonda se acumula selectivamente dentro de vesículas endolisosomales ácidas y las etiqueta fluorescentemente para controlar su transporte.
Lave para eliminar el exceso de sonda y agregue medio fresco.
Coloque el cultivo bajo un microscopio confocal y enfoque en una sola célula para realizar imágenes de lapso de tiempo.
Visualice la carga etiquetada como puntos fluorescentes distribuidos dentro de la región perinuclear, el
citosol y los procesos astrocíticos.
Capture múltiples planos focales a lo largo del eje Z para visualizar la carga en todo el volumen de celda tridimensional.
Realice imágenes a intervalos definidos para rastrear el transporte de carga intracelular a varias profundidades dentro de los astrocitos.
Analice el movimiento de la carga para distinguir entre la carga estacionaria, la carga que se mueve hacia la periferia de la celda y la carga que se mueve hacia el núcleo.
30 minutos antes de la obtención de imágenes, diluya una sonda
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