Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:39 min. • June 17th, 2025
Tome un cubreobjetos con neuronas primarias modificadas genéticamente en una cámara de imágenes llena de un tampón de imágenes.
Estas células expresan un indicador redox basado en proteínas fluorescentes en la matriz mitocondrial.
Coloque la cámara bajo un microscopio de fluorescencia, identifique las células bajo luz visible y luego cambie a imágenes de fluorescencia.
Aplique dos longitudes de onda de excitación para estimular el indicador y medir la emisión de fluorescencia.
La relación de intensidad de fluorescencia en estas longitudes de onda refleja el estado de oxidación mitocondrial.
Introducir NMDA para activar los receptores celulares de NMDA, causando la afluencia de calcio intracelular.
El aumento desencadena la absorción de calcio mitocondrial, induciendo la producción de ROS y
la oxidación mitocondrial.
El ROS oxida el indicador, alterando su fluorescencia y aumentando la relación de señal.
Introduzca agentes oxidantes para oxidar completamente el indicador, maximizando la relación de señal.
Retire el tampón y, a continuación, introduzca agentes reductores para reducir el colorante por completo, minimizando la relación de señal.
Utilice las proporciones de señal máxima y mínima p
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