Microinyección de cerebro de roedores con una microaguja de cuarzo

Tome una microaguja de cuarzo con orificios personalizados, conectada a una jeringa llena de agua y conectada a una microbomba para controlar la velocidad de entrega.

Tome una rata asegurada y anestesiada con el sitio de inyección expuesto.

Coloque la microaguja y coloque una película de parafina debajo. Ponga una gota de la solución inyectable sobre él.

Retraiga el agua para crear una burbuja de aire, luego baje la microaguja para extraer la solución.

Deje que se forme una gota, asegurando un paso despejado.

Use una aguja afilada para perforar la membrana del cerebro.

Inserte la microaguja mientras está ajustada a una velocidad de administración baja para evitar la penetración de fragmentos de tejido en la aguja.

Una vez colocado, profundiza un poco más. Detenga la entrega y vuelva a levantarla para evitar el reflujo.

Inicie la entrega con mayor velocidad. Los orificios de la aguja aseguran una distribución óptima de la solución inyectada.

Deje suficiente tiempo antes de retirar la aguja para facilitar la difusión.

Corta un pequeño trozo de película de parafina de plástico y colócalo sobre el cráneo. Con la pipeta de 10 microlitros, haga una gota de la solución para aplicar sobre la película de parafina de plástico. Detenga la bomba. Recupere ligeramente el empujador de la bomba y cree una pequeña burbuja de aire en el capilar tirando suavemente del pistón de la jeringa de microinyección.

Baje la punta de la aguja hasta que llegue a la gota. Extraiga la muestra tirando del pistón de la jeringa de microinyección muy lentamente, evitando la formación de burbujas. Vuelva a colocar el empujador de la bomba en contacto con el pistón y encienda la bomba a un caudal de 0,3 microlitros por minuto.

Luego espere hasta la formación de una gota antes de continuar con el siguiente paso. Luego, baje el flujo a 0.1 microlitros por minuto. Corte la duramadre con una aguja de punta biselada de acero inoxidable y baje lentamente la aguja para que entre en el tejido cerebral. Cuando se alcance la posición deseada, baje 0,1 milímetros adicionales y luego detenga la bomba.

Levante el brazo estereostático 0,1 milímetros y vuelva a encender la bomba a 0,3 microlitros por minuto. Después de eso, inicie el temporizador y la inyección. Controle el movimiento de la burbuja mientras se inyecta. Al final, detenga la bomba y espere cinco minutos antes de recuperar lentamente la aguja.