Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:31 min. • August 7th, 2025
Tome una rata anestesiada y aplique lubricante para los ojos.
Afeite la extremidad objetivo, esterilice la piel y coloque la rata para garantizar un acceso óptimo al músculo objetivo.
Levante e incida en la piel para exponer el músculo.
Consulte fotografías de placas terminales motoras o MEP, las regiones donde las terminales del axón de las neuronas motoras hacen sinapsis con las fibras musculares para formar uniones neuromusculares.
Mapee mentalmente la región MEP en el músculo expuesto.
Tome una micropipeta de vidrio que contenga un marcador fluorescente.
Inyecte el marcador por vía intramuscular en múltiples puntos a lo largo de la región MEP.
Retire cualquier exceso de marcador, cierre la incisión y administre un supresor del dolor.
La inyección mejora la disponibilidad del marcador en las uniones neuromusculares, facilitando su endocitosis en los terminales de los axones.
Los trazadores encerrados dentro de las vesículas se transportan retrógradamente a los cuerpos celulares de las neuronas motoras en la médula espinal.
La presencia de neuronas motoras marcadas con trazadores en la médula espinal sugiere el potencial neuroterapéutico de la administración dirigida a MEP.
Para inyectar el músculo vivo en las placas de los extremos del motor, primero use un extractor de micropipetas para tirar de micropipetas de vidrio graduadas equipadas con émbolos. A continuación, con un microscopio de disección, rompa las puntas de las micropipetas con un par de pinzas de modo que el diámetro interno de cada lumen sea de aproximadamente 0,5 milímetros. A continuación, llene las pipetas extraídas con oro fluorado.
Ahora, aplique lubricante ocular a un animal anestesiado y afeite la extremidad que se va a inyectar. Use una gasa para limpiar el área afeitada con tres exfoliantes alternos de clorhexidina y alcohol al 70%. Luego, coloque al animal en una almohadilla inferior limpia para permitir el acceso al músculo objetivo. Cuando el animal esté en posición, use un par de fórceps con agarraderas para levantar la piel sobre el músculo objetivo lejos de la musculatura subyacente y use tijeras quirúrgicas para hacer una incisión en la piel.
Tenga cuidado de que la incisión sea lo suficientemente grande como para exponer completamente el músculo de interés, con una interrupción mínima de la fascia. Luego, usando las fotografías de la placa terminal motora para transponer mentalmente la ubicación y la forma de la región de interés de la placa terminal motora al músculo, y administré de 3 a 4 inyecciones de 1 a 2 microlitros de oro fluorado a lo largo de toda la longitud de la región de la placa terminal motora.
Después de la última inyección, limpie suavemente el músculo para eliminar cualquier filtración. Luego use pinzas romas para acercar los dos extremos de la piel incisa. Cierre la herida con clips quirúrgicos e infiltre todo el tramo de la herida con el anestésico local adecuado.