Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:57 min. • June 18th, 2025
Comience con un pequeño ARN de interferencia que suprime la expresión de la proteína priónica, una proteína relacionada con enfermedades priónicas neurodegenerativas.
Añade una suspensión de liposomas catiónicos.
El ARNip cargado negativamente se une a la superficie del liposoma cargada positivamente.
Introduzca el péptido RVG-9r, una glicoproteína del virus de la rabia unida a una cola de poliarginina.
Los residuos de arginina facilitan la unión de RVG-9r-siRNA.
Inyecte los complejos liposoma-siRNA-péptido en la vena de la cola de un ratón anestesiado.
Los LSPC circulan por el torrente sanguíneo y llegan al cerebro.
El péptido RVG-9r se une a los receptores nicotínicos de acetilcolina en las células endoteliales, desencadenando la transcitosis mediada por receptores a través de la barrera hematoencefálica.
Dentro del cerebro, RVG-9r se une a los receptores neuronales de acetilcolina, lo que facilita la endocitosis de LSPC y la liberación de ARNip.
El complejo de silenciamiento inducido por ARN se une al ARNip.
La hebra pasajera se disocia, mientras que la hebra guía se une y escinde el ARNm de PrP, evitando la traducción y reduciendo la expresión de PrP.
Agregue 20 microlitros de la suspensión de liposomas de 4 nanomoles a 200 microlitros de una solución de ARNip madre de 20 micromolares e incube durante 10 minutos a temperatura ambiente. A continuación, añada 80 microlitros de un stock de 500 micromolares de péptido dirigido a RVG-9r a la solución de liposomas de ARNip e incube durante 10 minutos a temperatura ambiente.
Después de anestesiar a un ratón con isofluorano al 2 a 3% en oxígeno, cubra los ojos del ratón con ungüento oftálmico y confirme la anestesia realizando un pellizco en el dedo del pie. Proceda solo si no hay una reacción. Mientras mantiene la anestesia, coloque el ratón boca arriba o de lado para acceder a la vena de la cola.
Limpie la cola con etanol al 70% y luego use una jeringa de insulina de calibre 26 para inyectar 300 microlitros de LSPC o PALETS en la vena de la cola. Comience a inyectar distalmente y muévase proximalmente si la vena colapsa o se rompe. Coloque al ratón en una jaula limpia hasta que mantenga la decúbito esternal.