Transferencia de genes asistida por electroporación integrada en agarosa en progenitores de interneuronas corticales de ratón

Llene una micropipeta con una mezcla de ADN que contenga vectores plásmidos que lleven el gen de interés y un tinte de seguimiento. Asegúrelo en un micromanipulador.

Coloque un bloque de agarosa bajo el microscopio y coloque un corte de cerebro embrionario de ratón incrustado en agarosa con interneuronas corticales sobre él.

Baje la micropipeta e inyecte la mezcla de ADN en la región progenitora de interneuronas. El tinte de seguimiento marca el lugar de la inyección.

Coloque otro bloque de agarosa en un electrodo de placa de Petri y una columna de agarosa en el electrodo de cubierta.

Transfiera la rebanada al bloque y alinee el electrodo de cubierta sobre el sitio de inyección.

Aplique breves pulsos eléctricos para permeabilizar temporalmente las membranas celulares, permitiendo que los plásmidos entren en el núcleo.

Incube la rebanada en un medio para mantener la viabilidad celular.

Dentro del núcleo, el plásmido desencadena la expresión génica, produce la proteína diana y modula las funciones progenitoras de las interneuronas.

Para la inyección, mezcle el ADN del vector de expresión y control a una concentración de 1 microgramo por microlitro para cada vector, y agregue una solución ma