Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:44 min. • August 7th, 2025
Comience con un ratón restringido con atrofia muscular espinal y bulbar o afectado por SBMA.
Limpia su cola y caliéntala para dilatar la vena.
La SBMA es causada por un receptor de andrógenos mutado o gen AR que produce ARNm mutante.
Este ARNm sintetiza proteínas tóxicas en las neuronas motoras que afectan la transmisión de señales y provocan debilidad muscular.
A continuación, tome una jeringa que contenga virus adenoasociados recombinantes o vectores AAV con un plásmido que codifique microARN terapéutico.
Inserte la aguja en la vena de la cola e inyecte la solución.
Ahora, aplique presión para detener el sangrado, luego regrese al ratón a su jaula.
Una vez en circulación, el vector viral llega a las neuronas motoras que controlan la función muscular.
El virus ingresa a la célula a través de la endocitosis, liberando el plásmido.
El plásmido produce microARN maduro con secuencias complementarias al ARNm AR mutante.
Estos microARN se unen a los ARNm de AR, desencadenando su degradación.
Esto inhibe la acumulación de proteínas tóxicas y ayuda a mejorar la función neuromuscular.
Divida el stock de plásmidos de microARN AAV en alícuotas de 100 a 200 microlitros, que contienen una carga viral de 10 a 100 billones de genomas por mililitro. A continuación, cargue una alícuota en una jeringa y coloque una aguja de calibre 27 a 30.
Ahora, usando un inmovilizador de mouse estándar, asegure un mouse con la cola expuesta. Luego limpie la cola con alcohol al 70% y coloque una almohadilla tibia, debajo de la cola durante unos 30 segundos para aumentar la vasodilatación. Ahora, en la parte distal de la cola, inserte la aguja en la vena de la cola con el bisel hacia arriba y en un ángulo poco profundo, aproximadamente 15 grados.
Luego inyecte el virus y espere unos segundos antes de retirar la aguja. Después de retirar la aguja, aplique una presión moderada con dos dedos para detener cualquier sangrado. Luego regrese al animal a su jaula de origen.