Conductos sembrados con células de Schwann para la regeneración axonal después de una lesión de la médula espinal

Tomemos una rata anestesiada con vértebras expuestas, con las apófisis espinosas y las láminas extirpadas de los niveles torácicos T7 a T9.

Cortar las raíces dorsales y ventrales por encima y por debajo de T8.

Aplique solución salina para ayudar a detener el sangrado y elimine el líquido con una esponja.

Seccionar la médula espinal entre T8 y T9 para cortar las fibras nerviosas.

Coloque espuma comprimida en el espacio y aplique solución salina.

Una vez que se detenga el sangrado, retire la espuma y elimine el líquido residual.

Deslice un conducto de polímero piezoeléctrico preparado previamente, con las ventanas abiertas, sobre el muñón de la médula espinal rostral.

Inserte el muñón caudal en el extremo opuesto del conducto.

Inyecte células de Schwann, suspendidas en una matriz inyectable, a través de las ventanas del conducto.

Cierre las ventanas de forma segura.

Las células de Schwann pueblan el conducto y secretan factores neurotróficos que apoyan el crecimiento de los axones.

El conducto proporciona orientación estructural, mientras que sus propiedades piezoeléctricas generan señales bioeléctricas para el crecimiento de neuritas.

Gradualmente, los axones se regeneran a través del puente, restaurando la continuidad entre los tocones.

Cuando se hayan eliminado todas las láminas, confirme que los espacios entre las apófisis transversales sean visibles, especialmente en T8, y examine los huesos a lo largo de ambos lados entre T7 y T9 para confirmar que no haya fragmentos óseos que sobresalgan hacia afuera, y que las raíces dorsales deberían ser visibles. Con unas tijeras de resorte en ángulo, corte las raíces dorsales y ventrales por encima y por debajo de T8. Y agregue solución salina a la médula espinal para ayudar a detener el sangrado.

A continuación, coloque las tijeras de resorte en ángulo sobre la médula espinal en los espacios entre las apófisis transversales en T8 y haga un corte para cortar completamente el tejido nervioso. Coloque un pequeño trozo de espuma comprimida en el espacio resultante de 2 a 2,5 milímetros e inmediatamente agregue solución salina al área.

Mientras espera que los muñones del cordón cortados alcancen la hemostasia, corte los triángulos de absorción en trozos delgados y largos y retire un conducto del almacenamiento de PBS. Coloque algunos triángulos en el conducto para eliminar el exceso de PBS y confirme que las ventanas precortadas estén abiertas.

A continuación, retire el medio de un gránulo de células de Schwann de GFP y vuelva a suspender las células de Schwann en 10 microlitros de DMEM/F-12 frío. Agregue 10 microlitros de gel inyectable en frío a la suspensión celular y mezcle bien con pipeteo repetido. Luego, coloque la suspensión celular en hielo. Cuando los muñones del cordón estén listos, retire la espuma comprimida y luego use trozos largos de los triángulos de absorción para eliminar la solución salina y la sangre del área de laminectomía.

Luego, use una micro espátula para levantar suavemente el muñón rostral y deslice el conducto sobre el tocón con las ventanas hacia arriba. Cuidando que se inserte todo el muñón y que no haya exceso de sangrado en el conducto. Levante suavemente el muñón caudal y deslice el otro extremo del conducto sobre él. Cuidando que todo el muñón esté insertado y que las ventanas queden en la superficie dorsal.

Luego, use una micropipeta equipada con una punta de carga Western blot para inyectar 20 microlitros de la mezcla de matriz inyectable de células de Schwann GFP en el conducto a través de una de las ventanas precortadas. Y cierra las ventanas.