JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 2:11 min • August 7th, 2025
Comience con un tubo que contenga una suspensión de exosomas, que son nanovesículas extracelulares a base de lípidos.
Agregue solución salina tamponada con fosfato o PBS al tubo para obtener una dispersión uniforme de los exosomas.
Aspire la solución del exosoma y fíltrela con un filtro de membrana para eliminar los contaminantes residuales.
Transfiera esta suspensión de exosomas filtrada a un tubo nuevo.
Agregue una solución que contenga dopamina, un agente neuroterapéutico, seguida de saponina, un tensioactivo, a la suspensión del exosoma.
Incube la mezcla a temperatura fisiológica para mejorar la permeabilidad de la membrana exosomal.
La saponina elimina selectivamente los colesteroles unidos a la membrana de la membrana del exosoma, creando poros en las bicapas lipídicas exosomales.
La dopamina se difunde a través de estos poros hacia los exosomas.
Con el tiempo, los lípidos en la membrana exosomal se redistribuyen y los poros se cierran, encapsulando la dopamina dentro de los exosomas.
A continuación, ultracentrifuga la solución de mezcla para granular los exosomas cargados de dopamina.
Retire el sobrenadante que contiene dopamina y saponina libres.
El gránulo que contiene los exosomas cargados de dopamina está listo para más estudios.
Agregue 3 mililitros de PBS a la suspensión del exosoma recolectada anteriormente por ultracentrifugación y esterilice la suspensión diluida por filtración con un filtro de 0,22 micras.
Luego transfiera 500 microlitros de la suspensión de exosomas esterilizada a otro tubo.
A continuación, agregue secuencialmente 500 microlitros de 0,5 miligramos por mililitro de solución de dopamina y saponina en la suspensión esterilizada. Después de la incubación, ultracentrifugar la suspensión.