Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:07 min. • June 17th, 2025
Comience con fibras musculares murinas químicamente fijadas y permeabilizadas colocadas en los pocillos de una placa de pocillos múltiples.
Incubar en una solución de bloqueo para minimizar la unión de anticuerpos no específicos.
Agregue anticuerpos primarios dirigidos a una proteína presináptica expresada en la unión neuromuscular o NMJ.
Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos.
Incubar con anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos dirigidos a los anticuerpos primarios y una neurotoxina conjugada con fluoróforos que se une a los receptores de acetilcolina postsinápticos.
Lavar con tampón para eliminar los reactivos no unidos.
Coloque las fibras en un portaobjetos con medios de montaje, coloque un cubreobjetos y asegúrelo con imanes cilíndricos para aplanar las fibras.
Comience a obtener imágenes con un microscopio confocal-STED.
Tras la iluminación láser, las proteínas marcadas emiten fluorescencia.
La microscopía confocal no resuelve estructuras NMJ más finas con claridad debido a su resolución limitada y propagación de fluorescencia.
Por el contrario, la microscopía STED utiliza un láser de agotamiento para suprimir la propagación de la fluorescencia, lo que permi
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos