Imágenes in vivo del transporte de líquido cefalorraquídeo en un cerebro de ratón mediante macroscopía de fluorescencia

Comience con un ratón anestesiado con un cráneo expuesto quirúrgicamente colocado debajo de un macroscopio de fluorescencia.

La cabeza se estabiliza mediante una placa de cabeza sobre el cráneo, creando una ventana craneal.

Se inserta una cánula que contiene un marcador fluorescente en la cisterna magna, o CM, del cerebro.

El MC sirve como reservorio de líquido cefalorraquídeo, o LCR, que circula a través del espacio subaracnoideo que rodea el cerebro.

Usando luz visible, concéntrese en el cráneo.

Inyecte el marcador fluorescente en el CM y luego cambie a imágenes de fluorescencia.

Ilumine usando luz de una longitud de onda específica para excitar el trazador.

El trazador absorbe esta luz y emite señales fluorescentes.

Los trazadores fluorescentes viajan con el LCR, lo que permite visualizar su flujo a través del espacio subaracnoideo hacia los espacios perivasculares que rodean las arterias cerebrales y

las

arteriolas penetrantes, ingresando al tejido cerebral.

Capture la señal fluorescente a lo largo del tiempo para visualizar el flujo de LCR.

Coloque con cuidado el ratón y la bomba de infusión conectada a la cánula en un carro para transportarlos al macroscopio, y coloque el soporte de la cabeza en la platina del macroscopio. Asegúrese de que la línea desde la bomba de jeringa hasta la cánula Cisterna Magna no esté tensa y que no tenga torceduras. Observe la frecuencia respiratoria y la coloración rosada de las membranas mucosas para confirmar una buena oxigenación.

Encienda la cámara del microscopio y el diodo emisor de luz e inicie el modo en vivo. Ajuste el aumento del campo de imágenes para que la sutura nasofrontal en la parte superior del campo y la sutura lambdoidea en la parte inferior se puedan visualizar claramente. Una vez en su lugar, pegue con cinta adhesiva el soporte de la cabeza a la etapa del macroscopio y enfoque el macroscopio en el cráneo expuesto hasta que el plano focal se ubique en los lados laterales de los huesos parietales, posterior a las suturas coronales.

Para la infusión de trazador de LCR, ajuste la bomba de infusión a la velocidad y el volumen apropiados, y establezca la longitud de onda de excitación y el tiempo de exposición apropiados para el trazador para cada canal. A continuación, compruebe que la función de activación del macroscopio es correcta antes de iniciar simultáneamente la infusión del trazador y la obtención de imágenes.