Trasplante transnasal de células microgliales humanas derivadas de células madre pluripotentes inducidas en el cerebro del ratón

Tomemos un ratón anestesiado que haya sido alimentado con una dieta que contenga inhibidores.

En el tejido cerebral, este inhibidor elimina selectivamente las células microgliales.

Aplique una solución de hialuronidasa en ambas fosas nasales.

Coloque el ratón brevemente en posición supina para evitar el drenaje de la solución.

La hialuronidasa descompone la matriz extracelular de la mucosa nasal, aflojando las células y mejorando la penetración en los tejidos.

Administre microglía humana derivada de células madre pluripotentes inducidas o suspensión de células iPSMG en una fosa nasal.

Coloque el ratón en posición supina. Luego, administre la suspensión en la otra fosa nasal.

Repita la administración varias veces.

Las células iPSMG penetran en la mucosa nasal y siguen la vía olfativa para llegar al cerebro, evitando así la barrera hematoencefálica.

Deje que el mouse se recupere.

Anestesiar al ratón y administrar medios de trasplante por vía intranasal a intervalos regulares.

Los factores de crecimiento en los medios apoyan el crecimiento y la supervivencia de las células iPSMG trasplantadas en el cerebro del ratón.

Para preparar a los ratones para el trasplante transnasal, alimente a los ratones machos con una dieta que contenga PLX durante siete días. Al final del séptimo día, aproveche la dieta PLX y alimente a los ratones con una dieta normal. Una hora antes del trasplante transnasal de iPSMG, administre 2,5 microlitros de hialuronidasa en PBS en cada fosa nasal dos veces, utilizando una punta de pipeta de 10 microlitros para aumentar la permeabilidad a la mucosa nasal.

Coloque los ratones en posición supina después de la aplicación de hialuronidasa. Administrar 2,5 microlitros de hialuronidasa 10 minutos antes del trasplante transnasal de iPSMG. Aplique 2,5 microlitros de suspensión celular en una fosa nasal del ratón con una punta de pipeta de 10 microlitros. Coloque el ratón en posición supina durante cinco minutos antes de administrar la suspensión celular en la otra fosa nasal.

Administrar la suspensión celular cuatro veces, aplicando un volumen total de 20 microlitros por animal. 48 horas después del cese de la alimentación con PLX, repetir la administración de hialuronidasa y suspensión celular en los mismos ratones. Para la administración de citocinas, aplique 2,5 microlitros del medio de trasplante en una fosa nasal del ratón con una punta de pipeta de 10 microlitros.