Imágenes de tejido profundo del cerebro de un pez cebra utilizando un microscopio de fluorescencia de tres fotones

Coloque una placa de Petri que contenga un pez cebra anestesiado con un tubo insertado en su boca para administrar agua oxigenada debajo de la lente del objetivo de bajo aumento del microscopio de tres fotones.

El cerebro del pez cebra contiene neuronas modificadas genéticamente que expresan proteínas marcadas con fluorescencia para la visualización de tejidos profundos durante la obtención de imágenes.

Ilumine el plato con una fuente de luz LED y ajuste los parámetros de visualización para obtener claridad de imagen.

Baje la lente del objetivo hasta que el pez cebra sea visible, centrando su cabeza en el campo de visión.

Reemplace la lente de bajo aumento con un objetivo de alta resolución para imágenes de tres fotones.

Baje con cuidado el objetivo hasta que la cabeza sea visible sin contacto físico y establezca los valores del eje en cero.

Apague la fuente de luz LED y cierre la cortina oscura para minimizar el ruido de fondo.

Establezca los parámetros de imagen y realice imágenes de tres fotones, donde las longitudes de onda más largas permiten la excitación de tres fotones en el tejido profundo.

Tras la excitación, los fluoróforos neuronales emiten fluorescencia, lo que permite la visu