Imágenes de la migración de células tumorales en tejido de glioblastoma mediante microscopía confocal de barrido de lapso de tiempo

Comience con una rebanada de tejido de glioblastoma obtenida de un tumor extirpado quirúrgicamente.

Mantenga el corte de tejido en un medio de cultivo para apoyar la supervivencia celular.

Las células tumorales dentro del corte expresan una proteína fluorescente verde, o GFP, que facilita la visualización de las células tumorales durante la migración celular.

Coloque la placa de cultivo que contiene los cortes de tejido en el platina del microscopio confocal.

Coloque una incubadora en la parte superior del escenario para mantener la temperatura del medio.

Seleccione un objetivo y visualice los cultivos de corte bajo el microscopio.

Los microscopios usan luz láser para excitar las proteínas fluorescentes en las células.

Ahora, escanee la muestra capa por capa para capturar imágenes a varias profundidades.

Apila las imágenes para crear una representación 3D detallada de las celdas.

Luego, capture imágenes de pila Z a intervalos regulares para rastrear el movimiento y la dirección de las células, lo que permite el estudio de la migración de células tumorales a lo largo del tiempo.

Coloque el plato en una incubadora superior de platina de microscopio sellada al 5% de CO₂ de 37 grados de un microscopio confocal. Utilice un objetivo aéreo de 10x a larga distancia de trabajo junto con imágenes de fotones únicos o múltiples para capturar imágenes tridimensionales y resueltas en el tiempo de la migración celular. Visualice el corte con el microscopio, ubicando un campo adecuado con una densidad adecuada de células tumorales marcadas con fluorescencia entre el borde del corte y el centro del tejido. Luego, en el modo de análisis multidimensional del software de imágenes, establezca el centro de la pila z de modo que todas las posiciones a fotografiar contengan una señal celular fluorescente visible. Y establezca un tiempo adecuado para cada adquisición de z-stack.