Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:33 min. • June 17th, 2025
Tome un cubreobjetos recubierto de polímero que contenga un cultivo mixto de neuronas y astrocitos en la cámara de registro.
Estas células transfectadas expresan proteínas sensibles al calcio en el plasma y las membranas del RE, fluorescentes al unirse al calcio para rastrear la dinámica subcelular del calcio.
Agregue medios que contengan iones de calcio y cubra la cámara para evitar la evaporación.
Coloque la cámara bajo un microscopio de fluorescencia.
Los iones de calcio se unen a las proteínas sensibles al calcio. Tras la irradiación con luz azul, las proteínas sensibles al calcio en la membrana externa del RE emiten fluorescencia verde. Utilice esta fluorescencia verde para localizar astrocitos.
A continuación, irradie con luz verde. Las proteínas sensibles al calcio en la membrana plasmática emiten fluorescencia roja. Confirmar la presencia de fluorescencia roja en el mismo astrocito que exhibe fluorescencia verde.
Grabe imágenes de lapso de tiempo de proteínas sensibles al calcio en la membrana plasmática, seguidas de las proteínas sensibles al calcio en la membrana externa del RE.
Analice las imágenes para observar la actividad espontánea de calcio específica del compartimento en
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