Desarrollo de una red neuronal de ingeniería de microtejidos utilizando una microcolumna basada en hidrogel

Comience con un plato que contenga una microcolumna. La microcolumna tiene una capa exterior de hidrogel y una matriz extracelular, o núcleo ECM.

Agregue gotas de medio de cultivo al mismo plato.

Transfiera los agregados de células neuronales al plato, luego colóquelos en una de las gotas medianas.

Observe bajo un microscopio estereoscópico e inserte agregados celulares en ambos extremos de la microcolumna.

Luego, transfiera la microcolumna sembrada al medio para la viabilidad celular.

Incubar para permitir la unión celular a la ECM.

Con el microscopio estereoscópico, confirme la unión celular. Luego, agregue medio de cultivo para cubrir el plato e incubar.

Las neuronas unidas comienzan a extender sus axones a través de la ECM.

Reemplace regularmente el medio medio con un medio fresco para mantener los niveles de nutrientes.

Con el tiempo, los axones crecen y abarcan toda la longitud de la microcolumna, formando redes neuronales.

La red neuronal de ingeniería de microtejidos desarrollada está lista para reconstruir los circuitos neuronales dañados.

Proceda a la siembra celular inmediatamente después de la incubación. Transfiera aproximadamente de 10 a 20 microlitros de medio de cultivo a dos áreas libres en las placas de Petri que contienen las microcolumnas. Use una micropipeta para recolectar los agregados neuronales individualmente y transfiéralos a la placa de Petri que contiene las construcciones. Mueva los agregados con fórceps a uno de los pequeños grupos de medio de cultivo para preservar la salud celular.

Mientras observa bajo un microscopio estereoscópico, use fórceps para insertar un agregado en un extremo de las microcolumnas para micro-TENN unidireccionales o en cada extremo para arquitectura bidireccional. Luego, mueva la microcolumna sembrada al otro grupo pequeño de medio de cultivo para evitar la deshidratación y preservar la salud agregada. Cuando se hayan cargado todas las microcolumnas, incube a 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono durante 45 minutos para permitir que los agregados se adhieran a la ECM.

Después de la incubación, verifique que los agregados permanezcan en los extremos de las microcolumnas, utilizando el microscopio estereoscópico. Por último, inunde cuidadosamente las placas de Petri que contienen las micro-TENN con medio de cultivo con una pipeta. Coloque las placas en una incubadora a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono para cultivo a largo plazo.