T-laberinto alternancia forzada y la izquierda-derecha para la evaluación de las tareas de discriminación y de trabajo de la memoria de referencia en ratones

Se muestra la aplicación modificada de compañeros automáticos con sistema de seguimiento. Esta aplicación está construida con vías de plástico blanco que tienen paredes de 25 centímetros de altura. La MA está dividida en seis áreas mediante un hilo automático hacia el área A. Una de ellas es un compartimento STA.

S dos es una similitud de los compañeros de equipo. A uno debajo de A dos son la izquierda debajo de los brazos derechos, respectivamente. Las áreas P uno debajo de P dos comparan los pasajes de conexión desde las áreas A uno o A dos hasta A uno, de modo que el ratón pueda regresar al compartimento estático.

Las puertas se abren automáticamente hacia abajo aquí en esta película como demostración, una de las puertas se opera manualmente. Estos operadores mejorados nos permiten utilizar INB micro SSIS en la fisiología molecular y la técnica génica durante el desempeño de los compañeros de equipo. La N, está con un punto dispensador ya que el período transversal se utiliza como una recompensa alimenticia que activa un frasco dispensador de alimento seguido por el frasco descartado.

Puede observarse cómo el período se descarga desde el dispensador de alimento sobre la bandeja de comida y luego se descarta bajo el terreno hasta que el ratón es detectado por el sensor y registrado por un ordenador. En la práctica, el programa del sistema de seguimiento de video dispensa automáticamente el período, por lo que no es necesario hacer nada hasta el final de la sesión. La cámara CCD está montada encima del operador para registrar el comportamiento del ratón mediante el ordenador como una imagen dfor; la aplicación Parus se ilumina a 100 imágenes por centígrado.

Se recomienda que el Appell se coloque en una habitación insonorizada para reducir los ruidos ambientales alrededor de las salas de OID étnicas, comenzando una semana antes de las sesiones operativas, pesando la masa corporal diariamente y asignando a cada ratón una puntuación de velocidad para habituarse al período y al conjunto de placas de entrenamiento con alimento estándar hacia CHO, manteniendo entre el 80 % y el 85 % del peso con alimentación libre durante todo el experimento. Al día siguiente de alcanzar el peso objetivo, todas las jaulas que contienen los ratones deben trasladarse a la habitación insonorizada al menos 30 minutos antes del inicio del primer ensayo, evitando la luz directa en la habitación. Las luces recientes evitan colocar las jaulas en el estante superior.

Antes de colocar su ratón en los operadores, primero debe limpiar los operadores con una lengua, abriendo así su agua hipoclorosa super para prevenir un sesgo basado en las señales ProAct. Los seis espíritus cercanos de hoy por ratón en el centro, junto con los seis Mandamientos y uno por cada período en cada bandeja de los dispensadores de alimento. Coloque todos los ratones individualmente en jaulas dentro del Perus y permita que se muevan libremente.

Explore los Perus con ambos dos o antes de 30 minutos. Un día después de la arbitraje, los ratones serán sometidos a drenaje diario de sangre con la puerta cerrada y el depósito de la paleta en el tren de alimento. Coloque el ratón en el brazo izquierdo si el ratón consume la paleta durante cinco minutos AOPs, transfiera el ratón al brazo derecho y comience nuevamente el preentrenamiento. Este procedimiento de entrenamiento se repite hasta cinco veces al día y continúa hasta que el ratón los consuma.

Más del 80 % de los periodos se colocó al ratón en el compartimento estático. Se abren las puertas y se le da al animal la posibilidad de elegir en primer lugar un brazo rápidamente y regresar por sí solo al compartimento inicial. Luego, se le da al ratón la posibilidad de elegir en el futuro.

Ahora, el brazo opuesto al cuarto brazo es mordido. A continuación, el ratón regresa por sí solo a la caja estática y el procedimiento se repite. Esto se repite hasta 10 veces por día en ratones de control y experimentales.

Este criterio permite probar aún más a los ratones en la tarea de retención diferida insertando retrasos de 3, 10, 30 o 60 segundos entre la primera elección y la elección completa de sustantivos. Esta es una hoja de trabajo para registrar la información de esta tarea: identificación única del ratón, genotipo, patrón de perforación de oreja y espacio para registrar los datos manualmente en el programa de aplicación Land. Seleccione el identificador del proyecto de entrada en línea Plug TM.

Por ejemplo, sesión de entrada del nombre de la línea maestra. Por ejemplo, fecha de prueba, parámetros de entrada como fórmula con imagen capturada por la cámara C, momento de corte y tamaño del operador. A continuación, introduzca el identificador del ensayo.

Por ejemplo, el número de estación debe hacer referencia al nombre del archivo o a esta tarea y debe asignarse mediante un menú desplegable, ingresando el número de opción, el tiempo límite para errores de la máquina y el tiempo de penalización. Luego, establezca los valores de nitidez y contraste con la imagen capturada, seguido por una imagen binaria especial corta. Finalmente, tras verificar que las regiones de interés adecuadas se han recopilado, puede completarse el patrón para que el programa esté listo para la prueba.

Levante al ratón suavemente y colóquelo en el compartimento de inicio. Haga clic en el botón de inicio y la elección forzada. Al comenzar, puede ver imágenes binarias y en vivo y lesiones de en inte.

En este caso, el animal fue colocado en el brazo derecho del aparato hoy en el campo, el ratón entró en la página y la puerta estaba abierta. Totalmente, al elegir el descenso, se inició el período que fue entregado al brazo izquierdo. Dado que el ratón entró en el brazo izquierdo, la respuesta fue registrada como correcta.

El resultado de las respuestas se muestra en la ventana inferior luminosa del monitor. Aquí, las imágenes en vivo de ejemplo reproducidas en espíritu mostrado conducen a aves que indican que las palabras están cerradas y el ciclo amarillo indica el período de cruzamiento. Un ratón se somete a 10 ensayos consecutivos en una sesión por día.

El ratón se entrena diariamente para obtener una media del 80 % de respuestas correctas; el porcentaje de respuestas correctas, la latencia para completar la sesión, la distancia recorrida y el número de errores de omisión se calculan automáticamente mediante el programa. Tras cada sesión, el animal se devuelve a su jaula de alojamiento. Limpie la placa del dispensador, limpie las palancas con una toalla de papel y, a continuación, enjuague con agua limpia y muy pura para evitar sesgos basados en olores residuales. Si se trabaja con ratones experimentales y de control, y se desean evaluar posteriormente los ratones en la tarea de retención diferida, simplemente seleccione el archivo diferido en la configuración del programa e inicie la siguiente sesión.

El procedimiento es algo similar a la tarea de postación, pero ya sea de izquierda a derecha, el brazo siempre es Ed, como en la tarea de retención post aplicación del programa. Seleccione el nombre del archivo de referencia para esta tarea y el nombre del ratón desde el menú desplegable, coloque un ratón en el compartimento de inicio. Haga clic en el botón de inicio y ahora comience la elección.

En este caso, el brazo seleccionado siempre se muerde con el Periodo. Generalmente, un ratón se somete a entre 10 y 20 ensayos consecutivos por sesión al día. Los ratones se entrenan diariamente hasta alcanzar el criterio de un 80 % de respuestas correctas como promedio.

Los resultados se calculan automáticamente después de los ratones. Según estos criterios, se pueden realizar sesiones adicionales con los ratones para evaluar la memoria de retención, introduciendo un retraso entre las sesiones, o para evaluar la actividad conductual. Al cambiar la ubicación del brazo a la posición opuesta entre ensayos y sesiones, se grabó en video para que la persona corrigiera este proceso mediante una alfa hetero M complicada y controlada por el tipo LI en la tarea de automatización forzada.

El resultado demostrativo de la memoria de trabajo con un mutante pero con CBR deteriorado en la tarea del disco muestra que los ratones mutantes realizan esta tarea sin ningún problema y, incluso después de un retraso de un mes, demostraron no tener deterioro en el aprendizaje del autobús. Sin embargo, los mutantes mostraron un rendimiento deficiente. La prueba de compañeros de equipo es una de las pruebas conductuales más utilizadas para evaluar la marcha y la memoria de referencia.

En roedores, hemos mejorado el aparato de prueba, que presenta varias ventajas. Primero, las puertas deslizantes se abren automáticamente y el ratón puede entrar en la caja S por sí mismo tras cada ensayo. Esta automatización del MA reduce el tiempo y el esfuerzo necesarios para operar manualmente las compuertas y los dispensadores de alimento.

Y en nuestro laboratorio, un experimento puede operar hasta con cuatro compañeros de equipo al mismo tiempo. En segundo lugar, el aparato nos permite utilizar técnicas que requieren cableado en la cabeza, como las empleadas en microdiálisis in vivo, electrofisiología in vivo u optogenética in vivo, porque las puertas correderas se abren hacia abajo. Por último, el laberinto está diseñado de modo que el ratón solo pueda avanzar hacia adelante y no hacia atrás, lo que puede permitir un desplazamiento más fluido del animal.

En este video, presentamos este aparato modificado para compañero automático y nuestros protocolos aquí es el Dr. Hiro Pash. En nuestro laboratorio, Hirotaka demostrará los protocolos utilizando este aparato automatizado modificado en esta película. Hirotaka, ¿cuál fue su primera impresión sobre la prueba de compañeros con este aparato mejorado?

Mi primera impresión fue que el aparato y el programa informático eran muy fáciles de manejar y que la prueba podía realizarse rápidamente. ¿Cree que cualquier persona puede manipular estos operadores y ese programa, o se necesita algún tipo de entrenamiento especial? Estoy parcialmente de acuerdo.

Cualquiera puede aprender a manipular los operadores. No se requiere capacitación especial para realizar ninguno de los procedimientos de prueba. ¿Existen consejos o aspectos a los que se deba prestar atención durante la realización de la prueba?

Sí. Tengo cuidado de mantener la motivación por la comida administrada en la masa mediante el control diario del peso corporal. Las diferencias individuales en la motivación pueden provocar variaciones en el rendimiento de los compañeros de equipo.