Una técnica simplificada para fabricar un modelo de lesión isquémica

El objetivo general del siguiente experimento es hacer posible la creación de heridas isquémicas, no solo en conejos normales, sino también en conejos con resistencia reducida, como los ancianos o diabéticos. Todas las técnicas utilizadas actualmente para la creación de heridas isquémicas son altamente invasivas y, hasta el momento, ninguna de estas técnicas puede utilizarse en animales diabéticos. Este procedimiento utiliza una cirugía mínimamente invasiva que comienza con la realización de tres pequeñas incisiones en la piel sobre los tres haces vasculares.

El siguiente paso es aislar y proteger la vena central y el haz vascular mimoso para que la circulación sanguínea al oído se reduzca pero no se elimine por completo. Finalmente, los vasos restantes, los nervios y los tejidos subcutáneos se cortan o ligan a través de las incisiones cutáneas. La isquemia del oído se confirma por la ausencia de pulso arterial, aspecto del oído, diferencia de temperatura y saturación subcutánea de oxígeno.

Esta cirugía mínimamente invasiva puede parecer difícil de realizar, pero en realidad es muy fácil. La principal ventaja de esta técnica es que tiene muy poca alteración de la piel. Desde que publicamos por primera vez esta técnica en 2007, hemos recibido muchas preguntas.

Desde entonces, hemos simplificado aún más este procedimiento. Para que sea aún más fácil prescindir del uso de un microscopio, comience pesando el conejo seleccionado, anestesiando al conejo con una mezcla de ketamina y xilacina. Vigila las constantes vitales del conejo, en la parte dorsal se pueden identificar tres haces vasculares que irrigan la oreja.

Estos son el haz central, que es el más grande con colaterales que se conectan a otros buques. El haz mimoso, en el que la arteria suele ser muy pequeña o está ausente, y el haz craneal. En el lado ventral, la piel distal no recibe suministro de sangre de los vasos proximales.

En cambio, los haces de vasos en la oreja dorsal tienen numerosas ramas penetrantes a través del cartílago para proporcionar suministro de sangre a la piel ventral distal. En algunos conejos, también se produce un vaso subcutáneo muy pequeño en el lado ventral, que suministra sangre a no más de un tercio de la piel ventral. En una incisión cutánea circunferencial abierta, esencialmente no hay sangrado de una incisión ventral.

Antes de continuar, asegúrese de que el conejo no responda a los estímulos de dolor con un pellizco en los dedos del pie y un reflejo ocular, proteja los ojos del animal aplicando lágrimas artificiales. Ungüento. Mantén al conejo caliente durante la cirugía con una almohadilla térmica. Luego, con Betadine y alcohol, frote ambas orejas y las pieles circundantes para cubrir al conejo, de modo que solo queden expuestas las dos orejas.

Un oído se volverá isquémico, mientras que el otro servirá como control. El instrumental utilizado para la cirugía es un bisturí quirúrgico con hoja número 15, dos pares de pastillas, una para la piel y otra para otros tejidos blandos. Tres pinzas antimosquitos, uno o dos pares de microtijeras curvas, un par de tijeras pequeñas para cortar suturas y tejidos duros, un portaagujas y algunos punzones de acero inoxidable.

Comience la cirugía identificando los tres pedículos vasculares de acuerdo con las arterias y las venas. Usando una cuchilla número 15. Realice con cuidado una incisión vertical en la piel en el pedículo vascular central.

Aísla la vena central de los tejidos circundantes y protégela. Este paso rodea. La vena central para la retracción.

Diseccionar el nervio central libremente. Normalmente se encuentra en el lado mimoso de la vena. El nervio se corta con unas tijeras.

Diseccionar la arteria central libremente. Normalmente se encuentra en el lado craneal y más profundo que la vena, se ata la arteria y se divide. Limpie los tejidos alrededor de la vena central sobre el cartílago de la oreja.

Se hace una segunda incisión en la piel sobre el pedículo del cudo. Para conservar el paquete. Los vasos se diseccionan libremente y se rodean para su protección.

Esto es especialmente útil cuando la vena es grande, como en este conejo. Haga un túnel entre esto y la primera incisión. Corta los tejidos subcutáneos sobre el cartílago.

Se hace una tercera incisión en la piel sobre el haz craneal. Todo este haz está ligado y separado. Se corta la piel sobre el tercer paquete.

Esta vena está muy cerca de la piel, por lo que no debes hacer cortes demasiado profundos. A continuación, se disecciona todo el haz de vasos, se ata y se separa. Con un cuchillo y unas tijeras, haga un túnel subcutáneo.

Las tres incisiones interrumpen todos los tejidos subcutáneos, músculos, nervios y pequeñas ramas vasculares. Use disecciones afiladas y romas adicionales para limpiar la base, dejando el cartílago desnudo de aproximadamente cinco a 10 milímetros de ancho. El sangrado se puede controlar con presión de gasa.

La electrocauterización es innecesaria. La piel dentro de la oreja no se corta ya que no lleva mucha sangre. El aspecto importante de este procedimiento es asegurar la disección adecuada del túnel subcutáneo mientras se protegen los vasos.

Este no debería ser un procedimiento tan difícil. Después de la hemostasia, las tres incisiones de la piel se cierran con cuatro o cinco suturas de oh, y se revisan nuevamente para asegurarse de que las incisiones de la piel estén correctamente cerradas y no se vea sangrado. Se pueden crear heridas cutáneas circulares de espesor completo en el lado ventral de cada oreja con un punzón de acero inoxidable de seis milímetros.

La distancia entre las heridas es de al menos 20 a 30 milímetros. Se elimina la piel y el pericondrio del interior del punzón, pero el cartílago no se daña. Después de que se hayan creado las heridas en ambas orejas, cúbralas con una gasa temporalmente y transfiera al conejo a una sala de procedimientos para la aplicación del medicamento.

Después de que las heridas se hayan limpiado de cualquier coágulo de sangre, aplique medicamentos de prueba y control. Las heridas se cubren con un apósito oclusivo para evitar la desecación. Al comparar dos fármacos, aplique cada fármaco tanto en una herida proximal como en una distal.

Esto controla las diferentes tasas de cicatrización de heridas en el oído distal y proximal después de la operación. El oído isquémico generalmente se vuelve frío y cianótico con una reducción de la sensibilidad distal a la incisión. El edema I leve puede presentarse durante unos días, pero desaparece por sí solo y no es necesario ningún tratamiento.

El pulso de la arteria central está ausente. El movimiento de la oreja se reduce, pero no se elimina por completo porque algunos músculos todavía están unidos a la base de la oreja. Si el túnel se hace correctamente, se puede ver una hendidura clara entre las incisiones.

Un parche de fentanilo se adhiere a la piel de la espalda para aliviar el posible dolor postoperatorio. La temperatura de la piel en cada oído se mide diariamente con un termómetro. La circulación sanguínea se mide en el oído utilizando un tensímetro de oxígeno transcutáneo o un medidor de flujo láser Doppler.

Después de una semana, las suturas de las incisiones cutáneas pueden retirarse a partir de 2007. El procedimiento se ha utilizado en más de 70 conejos. Esto incluye 23 conejos diabéticos y cuatro ancianos.

Las diferencias de temperatura entre el oído no isquémico y el isquémico oscilaron entre uno y 10 grados centígrados, y la mayoría de los conejos se encontraban dentro del rango de dos a seis grados centígrados. La diferencia de temperatura fue mayor en los primeros días después de la cirugía, disminuyó gradualmente después del día 15, pero aún se mantuvo al final de un mes. Se tomaron seis muestras de tejido de cada oreja y se midieron los contenidos de fosfato de alta energía por HPLC, tanto un TP como la energía total.

Las concentraciones fueron mayores en los oídos normales que en los isquémicos. Los tiempos de cicatrización de las heridas fueron siempre más largos para el oído isquémico que para el oído no isquémico en animales no diabéticos y diabéticos en 15 conejos no diabéticos. El tiempo medio de curación fue de 17,8 días en el oído no isquémico frente a 21,8 días en el oído isquémico.

En 10 animales diabéticos de 12 meses, el tiempo medio de curación fue de 18,3 días en el oído no isquémico frente a 29,1 días en el oído isquémico. En todos los animales, incluidos los conejos diabéticos, las incisiones de la piel cicatrizaron normalmente sin ninguna complicación. Con 24 meses de diabetes, las heridas ventrales tienen una mayor tendencia a infectarse.

Esta característica lo hace más cercano a las heridas diabéticas humanas. Una muestra histológica muestra la cicatrización del túnel subcutáneo en el que el músculo está ausente y es reemplazado por tejidos fibrosos. Sin embargo, la piel está intacta.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar tratar a los animales de manera humana. Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en menos de una hora. Hemos utilizado esta técnica en más de 70 conejos, incluyendo 23 conejos diabéticos sin ninguna complicación como sangrado o infección.

Es un procedimiento muy seguro seguir este procedimiento. Se pueden realizar otros métodos, como la isquemia adicional, el daño nervioso y la inoculación bacteriana, para responder a preguntas adicionales, como úlceras vasculares, úlceras por presión y neuropatía diabética.