Los análisis morfométricos de las Secciones de retina
19 de febrero de 2012
Este video muestra tres tipos de análisis morfométricos de la retina, que incluyen la medición del espesor de la capa interna nuclear, cuantificar el número de células ganglionares de la retina (CGR) y la medición de los tamaños de las CGR. La técnica puede ofrecer una plataforma sencilla pero científica de análisis morfométricos.
Hola, soy Regina del laboratorio de Enfermedades Neurodegenerativas del Departamento de Anatomía de la Universidad de Hong Kong. Hoy les mostraré cómo realizar el análisis de progresión de la sesión retinal. Comencemos. Antes de realizar cualquier análisis, una muestra retinal debe ser recolectada y cuatro muestras de MyFitness deben ser sometidas a tinción con hematoxilina y eosina.
Después de eso, la sesión retiniana se divide en cuatro regiones. Son la región periférica superior, la región central superior, la región central inferior y la región periférica inferior. Después de definir las regiones, se adquiere una imagen de cada región a 10 veces 40 de aumento bajo el microscopio de haz claro de decor.
Ahora estamos listos para analizar la información morfológica de la retina. Esta sesión demostrará cómo medir el grosor de la capa nuclear interna. Abra el software llamado thorough investigator.
Seleccione los 40 tipos, luego en la barra principal de dos opciones seleccione abrir imagen. En la pestaña archivo, elija una imagen de una región retiniana que desee analizar. Elija el tipo de línea de contorno desde el menú desplegable de la barra principal de dos opciones.
Asegúrese de que el movimiento automático esté activado. Puede ampliar la imagen haciendo clic en el botón de acercar. Puede usar el botón de alejar para reducir el tamaño de la visualización de la imagen.
Tanto el trazado como la muestra pueden moverse en cuatro direcciones diferentes accionando los botones de movimiento de la causa. Haga clic con el botón derecho en la ventana de trazado y seleccione trazado de grieta simple. Dibuje la línea contigua a lo largo del borde interno de la capa interna.
Si se comete un error, haga clic en la ventana de trazado y presione el botón deshacer para borrar el último punto dibujado. Continúe el trazado hasta el último punto de la línea. Cuando finalice el dibujo, haga clic en la ventana de trazado, seleccione un contorno abierto y lance la imagen haciendo clic en acercar.
Haga clic con el botón izquierdo en la ventana de trazado. Para ampliar la imagen, seleccione un marcador en la barra de marcadores dos en Marcus. En el punto de unión.
Después de agregar todos los marcadores, seleccione el icono de marcador en la posición de la barra del marcador dos y el cursor. En el centro de uno de los marcadores, seleccione mediciones rápidas de ángulos en la pestaña dos haciendo clic derecho en la ventana de trazado y luego seleccione la opción continua. Mida el ángulo haciendo primero clic en el centro de un marcador, que esté adyacente al marcador seleccionado.
Para un extremo del segmento de línea, mueva el más cercano al centro de interés. Marcador y grieta. Nuevamente, extienda la línea de banda elástica hasta el borde externo de la capa inia y ajuste el ángulo hasta 90 grados.
Alcance la grieta izquierda en el punto deseado. Coloque un cuadro de diálogo que muestre la medición del ángulo, el cual aparecerá justo después del clic. Presione la tecla Intro mientras mantiene el ratón inmóvil hacia la izquierda.
Haga clic en la ventana de trazado para que la línea se dibuje desde un extremo hasta el nuevo extremo seleccionado. Rompa la línea en la ventana de trazado y elija un control abierto. Debemos tomar cuatro mediciones de los dedos de la capa nuclear interna en cada región, donde se dibujarán cuatro líneas.
Perpendicularmente desde la base de control nocturna hasta el borde externo de la capa nuclear interna, y lance la imagen para poder ver claramente el borde. Si la punta de la línea no se encuentra en el extremo externo de la capa nuclear interna, podemos unirla o acortar la línea en el modo de edición. Seleccione el modo de edición y elija la línea.
Haga clic en la ventana de trazado y elija un punto de búsqueda en el control eléctrico; agregue un punto en el borde exterior mientras que la edición del punto debe realizarse a lo largo de la misma línea. Elimine el punto original. Luego se puede obtener una nueva alineación con un elevador.
Reduzca el tamaño de la imagen haciendo clic en el botón de alejar. Desactive el modo de edición y dibuje el último segmento de línea. Después de dibujar las líneas en orden, seleccione el modo de edición.
Haga clic derecho en la ventana de trazado y colocamos los cuatro segmentos de línea de forma correspondiente. Ahora podemos obtener las cuatro mediciones presionando el botón de medición CONT. Seleccione estas cuatro mediciones y péguelas a un especialista haciendo clic en copiar.
Para hacer clic en la bola, seleccione "Guardar como" en la pestaña Archivo. Los datos de trazado se pueden guardar como un archivo de datos. En esta parte, cuantificaremos el número de células de cola roja gagan; seleccione imagen abierta.
Bajo la pestaña archivo, seleccione una imagen de una región retiniana deseada que desee analizar. En primer lugar, debemos identificar cuáles son las células viables y cuáles son las células muertas. Aquellas células con forma aproximadamente regular y con citoplasma y núcleo claramente observados se consideran como células ganglionares retinianas viables.
Aquellas células pequeñas y condensadas se consideran como esa célula. Elija el tipo de línea de contorno en el menú desplegable de la barra principal. Dibuje una línea a lo largo del borde de la capa de fibras izquierda y realice el trazado con la opción de contorno abierto.
Agregue un marcador en cada extremo: uno en la punta de la línea y el otro en la posición cercana al equipo. Seleccione el icono de marcador en la barra de marcador dos. Coloque el cursor en el centro de los marcadores.
En la punta, seleccione medición rápida de ángulos bajo la pestaña. Haga clic derecho dos veces en la ventana de trazado, seleccione la opción continua y simplemente las líneas elásticas, y mida un ángulo de 19 grados. Presione la tecla Intro inmediatamente después de que se capture el cuadro de destino.
Pero recuerde que el ratón aún tiene simultáneamente la izquierda. Rompa la ventana de trazado para que una nueva línea pueda extenderse particularmente desde la punta. Rompa en la ventana de trazado y elija un control abierto.
Dibuje otra nueva línea exactamente de la misma manera que en el otro extremo. Hemos creado dos límites dentro de los cuales se cuenta el número de células de ratin gagan. Seleccione un tipo de marcador y coloque uno en cada cinco células.
Elige un límite como línea de exclusión, que la célula toca y que no es actual. Selecciona otro tipo de marcador para las células muertas. El número de cada tipo de espacio de marcador se mostrará junto al icono del marcador, respectivamente.
En la barra del marcador dos, seleccione el modo de edición y seleccione la línea base del contorno. Rompa la línea en la ventana de trazado y finalice nuevamente la línea. El nombre de la línea base del contorno se puede obtener pulsando el botón de medición de contorno.
El número de células puede expresarse entonces por milímetro del nombre. Así que guardémoslo bajo la pestaña archivo. Los datos de trazado y los datos del marcador pueden guardarse como un archivo de datos.
Esta parte demostrará cómo medir el lado celular de una imagen seleccionada de una célula ganglionar retinal. Bajo la pestaña archivo, elija una imagen de una región retinal deseada que desee analizar. Seleccione una célula ganglionar viva según los criterios descritos en la parte anterior.
Entonces, en la célula viva, elija el tipo de línea de contorno desde el punto de anotación de las dos barras principales. Dibuje una línea de contorno a lo largo de la circunferencia de la célula aproximadamente al final, haga clic derecho en la ventana de trazado y seleccione finalizar contorno cerrado. El área de la célula se mostrará bajo el ítem de área en el cuadro de diálogo de mediciones de control.
Este video ha demostrado tres métodos sencillos que pueden analizar objetivamente la retina. Esperamos que este video sea de utilidad.
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos
Descripción general
Este video demuestra tres tipos de análisis morfométricos de la retina, incluyendo la medición del grosor de la capa nuclear interna, la cuantificación del número de células ganglionares de la retina (RGCs) y la medición del tamaño de las RGCs. La técnica proporciona una plataforma científica para estos análisis.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Morfometría retiniana
- Cuantificación celular
Antecedentes
- La salud de la retina es crucial para la visión.
- Los análisis morfométricos ayudan a comprender las enfermedades retinianas.
- Las células ganglionares de la retina son vitales para transmitir la información visual.
- La medición de las CCR puede proporcionar información sobre las afecciones neurodegenerativas.
Objetivo del estudio
- Demostrar técnicas morfométricas para el análisis de la retina.
- Cuantificar las células ganglionares de la retina y sus tamaños.
- Medir el grosor de la capa nuclear interna.
Métodos Utilizados
- Preparación de muestras de retina.
- Tinción con hematoxilina y eosina (H&E).
- División de la retina en regiones definidas para el análisis.
- Adquisición de imágenes a diversas ampliaciones.
Resultados principales
- Medición exitosa del grosor de la capa nuclear interna.
- Cuantificación de las células ganglionares de la retina.
- Evaluación del tamaño de las CCR en diferentes regiones retinianas.
- Presentación de un enfoque sistemático para la morfometría retiniana.
Conclusiones
- Las técnicas presentadas son efectivas para el análisis retiniano.
- Estos métodos pueden ayudar a comprender las patologías retinianas.
- Estudios futuros pueden basarse en este marco para investigaciones adicionales.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
El análisis morfométrico objetivo de secciones retinianas permite una cuantificación precisa de la pérdida neuronal y de los cambios estructurales, lo que apoya la validación de objetivos en modelos de enfermedades neurodegenerativas. Al reducir la variabilidad de las mediciones y aumentar la sensibilidad ante cambios mínimos, este enfoque mejora la confianza predictiva al evaluar la eficacia terapéutica. Proporciona una plataforma trasladable para evaluar patologías retinianas en todas las etapas del descubrimiento de fármacos.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Valor científico: Permite la evaluación de hipótesis terapéuticas mediante la cuantificación de alteraciones en la densidad de células ganglionares retinianas y en el tamaño del soma en modelos de enfermedad.
- Valor operativo: Apoya la reducción del riesgo biológico mediante mediciones reproducibles del grosor de la capa nuclear interna y de las morfometrías de las capas celulares.
- Valor predictivo: Facilita la selección de carteras al proporcionar datos morfométricos absolutos y reproducibles para comparaciones entre estudios.
Desarrollo de Pruebas y Tamizaje
- Listo para ensayo: Prepara sistemas biológicos validados para flujos de trabajo posteriores mediante protocolos estandarizados de adquisición de imágenes y trazado basados en regiones.
- Salida cuantitativa: Genera mediciones absolutas de longitud y tamaño directamente exportables a archivos analíticos, mejorando la consistencia de los datos.
- Escalabilidad: Permite la evaluación confiable de compuestos mediante la reducción de la variabilidad del observador y un aumento en la sensibilidad para detectar cambios retinianos mínimos.
Investigación Translacional y Preclínica
- Relevancia para la enfermedad: Se alinea con estrategias traslacionales de biomarcadores al vincular la pérdida de células ganglionares retinianas y los cambios en el grosor de capas con los resultados terapéuticos en modelos de glaucoma y excitotoxicidad.
- Continuidad preclínica: Apoya decisiones de avance ajustadas al riesgo mediante puntos finales morfométricos objetivos y repetibles en distintas regiones de la retina.
- Reducción del riesgo mecanicista: Se centra en la valoración predictiva mediante el aislamiento de cambios estructurales independientemente de los ensayos funcionales.
Integración de la Línea de Procesamiento y Flujo de Trabajo
Este método se integra en el continuo de descubrimiento desde la validación inicial del blanco hasta la identificación del fármaco candidato y la evaluación preclínica, proporcionando lecturas estructurales que complementan las evaluaciones funcionales en modelos de enfermedades retinianas.
- Biología del Descubrimiento: Apoya la comprobación de hipótesis y la aclaración de vías al cuantificar el número de células, el tamaño y el grosor de la capa en regiones retinianas definidas.
- Selección: Ofrece disponibilidad y reproducibilidad del ensayo mediante el análisis estandarizado de cortes teñidos con H&E y trazado guiado por software.
- Análisis: Proporciona mediciones cuantitativas de variables dependientes (recuento celular, tamaño del soma, grosor de la capa) que permiten comparaciones estadísticas entre grupos de tratamiento.
- Investigación Traducional: Se conecta con la continuidad preclínica a través de puntos finales estructurales relevantes a la enfermedad en modelos de excitotoxicidad inducida por NMDA, isquemia-reperfusión y glaucoma.
- Reutilización Empresarial: Establece una capacidad reutilizable para la morfometría retiniana en múltiples modelos de enfermedad e intervenciones terapéuticas.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Confianza predictiva en la validación de objetivos mediante la reducción de la ambigüedad mecanicista en la neurodegeneración retiniana.
- Valor operativo: Normalización, reproducibilidad y escalabilidad de las mediciones morfométricas entre operadores y sitios.
- Valor estratégico: Mejores decisiones de continuar/no continuar, eficiencia del capital y reducción del riesgo biológico en fases avanzadas mediante la detección temprana de biomarcadores estructurales.
- Impacto en la cartera: Priorización y toma de decisiones de avance ajustadas al riesgo, basadas en cambios estructurales retinianos cuantificables.
Consideraciones de Implementación
- Conocimientos especializados necesarios en histología, microscopía y manejo de software morfométrico (Stereo Investigator).
- Los equipos necesarios incluyen microscopio de campo claro, sistema de trazado computarizado y software de análisis de imágenes.
- La estandarización entre equipos requiere el cumplimiento del protocolo en cuanto a la definición de regiones, técnica de trazado y replicación de mediciones.
- Las consideraciones para la adaptación entre diferentes sistemas modelo implican ajustar la magnificación, el muestreo de regiones y los criterios de identificación celular.
- Las limitaciones prácticas incluyen la dependencia de la calidad de los cortes tisulares y la consistencia de la tinción para una delimitación precisa de los bordes.
