Name: La implantación intracraneal con posterioridad 3D En Vivo Bioluminiscentes imagen de gliomas murino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Aprende a crear un modelo intracraneal de gliomas en ratones C57BL/6 mediante implantación estereotáctica de células GL261 y seguimiento mediante imagen bioluminiscente tridimensional in vivo.

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Nos gustaría agradecer al Dr. Joshua B. Rubin por el generoso regalo de los plásmidos para el sistema de lentivirus, así como Rao Mahil por sugerencia útil en la preparación de las células GL261-luc. Agradecemos a los estudiantes Apoyo a la investigación del tumor cerebral (SSBTR), la Fundación Neurológica Barrow y la Fundación Wallace por su generoso apoyo. Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por el Cuidado de Animales institucional y el empleo de Hospital St. Joseph y el Centro Médico.

<ol><li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathological+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. im, Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li>
<li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Living+Image+Software+Version+4.0.+VivoVision+Systems%22">Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems</a>. , (2010).</li>
<li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , 2nd Ed, Academic Press. (2001).</li>
<li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li>
</ol>

Acceso libre a este artículo es patrocinado por Caliper Life Sciences.

El inóculo de células se infunde a una profundidad de 2,6 mm de la superficie del cerebro después de la creación de una bolsa de 0,4 mm. Para asegurar la colocación adecuada y la profundidad de la aguja de una radiografía se puede tomar con un brazo-C o similar de rayos X de dispositivos de imagen intensificando, sin embargo, esto es opcional. Las complicaciones de la cirugía pueden surgir si el animal no está adecuadamente sedado, momento en el que el animal puede moverse durante la infusión de células. Esto puede causar fugas de la mezcla de células o sangrado de trayecto de la aguja. La fuga de las células causa el crecimiento ectópica de las células tumorales. También es importante no perforar el ventrículo que se puede hacer si el burrhole se hace por dentro de la de 2,3 mm se describe en el protocolo 4. La colocación correcta de la aguja y propagación de células se puso a prueba mediante la infusión de un ratón con dos l colorante azul de metileno y la disección de los tejidos cerebrales para verificar la ubicación del colorante infundido. En este protocolo se ha utilizado el espectro IVIS de imágenes in vivo del sistema y tque estar de software de imagen (v 4.0), diseñado para su uso con este instrumento. (Caliper Life Sciences). Cualquier sistema de imagen comparable en vivo y herramientas de análisis de imagen se puede utilizar para obtener resultados similares. Estos sistemas ofrecen algunas ventajas sobre las tradicionales imágenes por resonancia magnética (MRI) para seguir el crecimiento de un tumor intracraneal experimental. El más obvio es el costo relativo de los dos instrumentos - máquinas de resonancia magnética de los animales son mucho más caros y suelen requerir los servicios de un técnico de MRI especializada. Imágenes in vivo, como lo que se describe aquí se puede hacer por el usuario final. Los datos de la bioluminiscencia es cuantitativo, mientras que la cuantificación de los datos de la RM es mucho tiempo y un poco inexacta. Además, imágenes de resonancia magnética muestran edema y la inflamación, además de las células tumorales y puede ser difícil separar el efecto del tratamiento de tumores. Por estas razones, la obtención de precisas mediciones volumétricas del crecimiento del tumor puede ser un desafío. Bioluminiscencia requiere ATP, Por lo tanto, sólo las células tumorales de vida contribuyen a los datos del tamaño del tumor. A pesar de esto, hay algunas ventajas de la RM, si una máquina está disponible. Las células no tienen que estar etiquetados con un marcador bioluminiscente a visualizar por resonancia magnética. La capacidad de visualizar el edema peri-tumoral puede ser una ventaja para algunos protocolos experimentales. Una de las ventajas de ambas tecnologías es que el uso de uno no excluye el uso de la otra, por lo que se pueden obtener datos sobre el crecimiento del tumor, así como la presencia de peri-tumoral edema y la inflamación del mismo animal, cuando ambas tecnologías están disponibles para el investigador.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo o el suministro </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> GL261-luc2 Bioware ultra </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco Eagle modificado (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticina (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> Suero fetal bovino (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfato (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr Ratones </td><td> NCI-Frederick </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA lágrimas lubricantes oftálmicos pomada </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (clorhidrato de ketamina) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (clorhidrato de xilazina) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> Pequeños Animales de instrumentos estereotáxica </td><td> Kopf Instruments </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump con SYS-Micro4 Controller </td><td> Mundial de Instrumentos de Precisión </td><td> UMP3-1 </td><td> Si no está disponible, es posible inyectar manualmente </td></tr><tr><td> 10μl jeringa con aguja de calibre 26 biselados </td><td> Mundial de Instrumentos de Precisión </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison Pinzas </td><td> Mundial de Instrumentos de Precisión </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield disector </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16 g 1 ½ precisión Glide aguja </td><td> Beckton Dickinson and Company (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> Manejar la hoja quirúrgica </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> Tamaño de la hoja 15 </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> Sutura Vicryl 4-0 </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> La cera de hueso </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Yodo povidona palillos de hisopo </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-luciferina de sal de potasio </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Foráneo (isoflurano) </td><td> Baxter </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero Microscopio </td><td> Carl Zeiss, Inc. </td><td></td><td> Cualquier microscopio quirúrgico es suficiente </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS del espectro con el sistema opcional de la anestesia </td><td> Caliper Life Sciences </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

la implantación intracraneal con posterioridad 3d en vivo bioluminiscentes imagen de gliomas murino

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

El ratón glioma 261 (GL261) es reconocido como un sistema en el modelo in vivo que resume muchas de las características del glioblastoma multiforme humano (GBM). La línea celular fue inducida inicialmente por inyección intracraneal de 3-metil-cholantrene en un C57BL / 6 cepa de ratón singénico 1, por lo tanto, inmunocompetentes ratones C57BL / 6 se puede utilizar. Mientras que utilizamos el GL261, el siguiente protocolo se puede utilizar para la implantación y seguimiento de cualquier modelo de ratón de tumores intracraneales. GL261 células fueron diseñados para expresar de forma estable la luciferasa de luciérnaga (GL261-luc). También hemos creado el más brillante GL261-luc2 de líneas celulares mediante transfección estable del gen luc2 expresa del promotor de CMV. Ratones C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr (variante albina de C57BL / 6) del Instituto Nacional del Cáncer, Frederick, MD se utiliza para eliminar la atenuación de la luz causada por la piel y el pelo negro. Con el uso de C57BL albino / 6 ratones; imágenes in vivo utilizando el espectro IVIS en vivo imel envejecimiento del sistema es posible a partir del día de la implantación (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). El GL261-luc y GL261-luc2 líneas celulares mostraron el mismo comportamiento in vivo como la de sus padres GL261 células. Algunas de las características compartidas histológicos presentes en GBMs humanos y este modelo de ratón son: necrosis tumoral, pseudopalisades, la neovascularización, la invasión, hipercelularidad, y la inflamación 1. Antes de la implantación de los animales fueron anestesiados con una inyección intraperitoneal de ketamina (50 mg / kg), xilacina (5 mg / kg) y buprenorfina (0,05 mg / kg), colocado en un aparato estereotáctico y una incisión se realizó con un bisturí sobre la la línea media del cráneo. A burrhole se hizo posterior a la de 0,1 mm y 2,3 mm bregma a la derecha de la línea media. Una aguja se inserta a una profundidad de 0,4 mm y 3 mm de retirarse a una profundidad de 2,6 mm. Dos l de GL261-luc o GL261-luc2 células (10 7 células / ml) fueron infundidos en el transcurso de 3 minutos. El burrhole se cerrócon bonewax y la incisión fue suturada. Tras el implante estereotáctico de las células bioluminiscentes son detectables a partir del día de la implantación y el tumor puede ser analizada utilizando la función de reconstrucción de imágenes 3D de los instrumentos de espectro IVIS. Los animales reciben una inyección subcutánea de 150μg luciferina / kg de peso corporal de 20 minutos antes de la imagen. La carga tumoral se cuantifica utilizando bioluminiscencia tumor significa que el paso del tiempo. Los ratones portadores del tumor fueron observados diariamente para evaluar la morbilidad y fueron sacrificados cuando uno o más de los siguientes síntomas están presentes: letargo, falta de deambular, postura encorvada, falta de novio, anorexia resulta en la pérdida&gt; 10% del peso. Los tumores fueron evidentes en todos los animales en la necropsia.

Implantación intracraneal de GL261 células en ratones C57BL / 6 produce los gliomas malignos que recapitular muchas de las características del glioblastoma multiforme humano. Hemos utilizado GL261 células que expresan establemente la luciferasa que nos permita utilizar<em&gt; En vivo</em&gt; Imágenes para seguir la progresión del tumor. La cirugía y 3D<em&gt; En vivo</em&gt; Imágenes se muestran.

La implantación intracraneal con posterioridad 3D En Vivo Bioluminiscentes imagen de gliomas murino

El glioma 261 (GL261) de ratón es reconocido como un sistema modelo in vivo que recapitula muchas de las características del glioblastoma multiforme (GBM) humano. El ...

El objetivo general de este procedimiento es crear un modelo intracraneal de gliomas que pueda seguirse cuantitativamente a lo largo del tiempo mediante imágenes in vivo. Esto se logra primero obteniendo células de glioma luminiscentes cultivadas y preparando una suspensión celular de uno a dos veces 10 a la séptima células por mililitro. El segundo paso del procedimiento consiste en la implantación estereotáxica de las células obtenidas en el lóbulo frontal derecho del cerebro del ratón.A continuación, se realiza la inyección subcutánea de Luciferina en el animal y se genera una curva cinética de expresión de Luciferina. Mediante el sistema de imagen in vivo IVUS, el paso final del procedimiento consiste en obtener imágenes seriadas de los animales y rastrear el crecimiento tumoral. Finalmente, se pueden obtener resultados que muestran el crecimiento de las células tumorales y la localización tridimensional del tumor mediante una señal bioluminiscente detectable utilizando el sistema de imagen in vivo IVUS.La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes, como la resonancia magnética (MRI), es que la imagen de bioluminiscencia identifica únicamente células tumorales viables y no requiere un técnico especializado en MRI. Asimismo, permite obtener imágenes de animales simultáneamente en un período de tiempo más corto. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la neuro-oncología, como cuál es la eficacia de nuevas terapias para tumores cerebrales.En vivo, aunque este método puede proporcionar información sobre los tumores cerebrales, también puede aplicarse a otros sistemas orgánicos, como los cánceres de pulmón, próstata y hepático. Para prepararse para este procedimiento, cargue al menos tres microlitros del inóculo de células de glioma en una jeringa de 10 microlitros y 50 milímetros con una aguja biselada de calibre 26.Asegúrese de que las células no estén agrupadas, ya que podría ser necesario recargar la jeringa. El ratón anestesiado se coloca en el marco estereotáctico y la cabeza del ratón se fija utilizando la pinza bucal como se muestra en esta imagen. Coloque la jeringa cargada en el microinyector.Para comenzar el procedimiento quirúrgico, realice una incisión en la piel utilizando una hoja número 15 y una pinza con dientes. Haga una incisión de 10 a 15 milímetros entre los ojos del animal, avanzando hacia las orejas del animal, exponiendo el bgma. Asegúrese de identificar adecuadamente el bgma para.Puede confundirse fácilmente con la zona sinusal que se encuentra distal al bma. Con una aguja de calibre 16 y una longitud de una pulgada y media, haga un orificio de trepanación a 0,1 milímetros posterior a la sutura coronal y a 2,3 milímetros a la derecha de la línea media, aplicando una ligera presión sobre la aguja mientras gira hasta atravesar el cráneo y exponer el cerebro. Mueva la aguja de inyección utilizando el microinyector hasta que apenas toque la superficie del cerebro. Desde esta posición, avance la aguja a una profundidad de tres milímetros.Mantenga la aguja en su lugar durante tres minutos. A continuación, retire la aguja 0,4 milímetros hasta una profundidad total de 2,6 milímetros por debajo de la superficie del cerebro. Esto crea un pequeño bolsillo donde se infundirán las células para asegurar una colocación y profundidad adecuadas.Pueden tomarse imágenes de rayos X de las profundidades de la aguja utilizando un brazo en C; infunda la suspensión celular durante tres minutos utilizando el microinyector ajustado a un volumen de 2000 nanolitros con una velocidad de infusión de 667 NANOLITROS por minuto. Después de la infusión, mantenga la aguja en su lugar durante dos minutos para prevenir fugas desde el sitio de infusión. Luego, retire lentamente la aguja por completo.Una vez que se haya retirado la aguja, cubra el orificio de trepanación con cera ósea utilizando un disector Penfield. Finalmente, sutúre la incisión utilizando una sutura Vicryl de calibre 4-0, asegurándose de que no queden espacios grandes en la piel. In vivo.La imagen de bioluminiscencia se realiza con el sistema de imagen IVIS Spectrum. Inicie el software Living Image e inicialice el sistema de imagen IVIS Spectrum haciendo clic en el botón de inicialización del sistema IVIS ubicado en la parte inferior derecha del panel de control. Seleccione el modo de imagen luminiscente en la parte superior izquierda del panel de control para determinar el tiempo óptimo de imagen de bioluminiscencia.Después de la inyección de Lucifer en el animal, es necesario realizar primero un estudio cinético con el animal sedado en la cámara de imagen. Tome la primera imagen aproximadamente cinco minutos después de la inyección de Lucifer para generar una curva cinética de la expresión luciferiana. Cree una secuencia para tomar imágenes cada tres minutos durante hasta una hora.Haga clic en el botón de configuración de secuencia en el panel de control. En el panel de control, especifique los ajustes para la primera imagen bioluminiscente de la secuencia, comenzando con iluminación media y exposición automática.Para determinar el tiempo de exposición óptimo, se recomienda seleccionar el botón de retardo en el editor de secuencias y especificar un tiempo de retardo de tres minutos entre cada adquisición. Haga clic en agregar; luego, los parámetros de adquisición se añaden a la tabla.Repita este paso para cada imagen de la secuencia una vez establecida la curva. El tiempo óptimo de adquisición de imágenes puede determinarse graficando la intensidad de la señal frente al tiempo para obtener la señal más fuerte y precisa. Los animales deben ser adquiridos en el momento de mayor conteo de fotones in vivo, que es aproximadamente a los 25 minutos después de la inyección de luciferina, como muestra esta curva.Para adquirir la imagen de un animal experimental, utilice la opción automática en el tiempo de adquisición. Esto permite que el software determine el bin y la duración óptima para la adquisición de la imagen. Guarde los archivos del programa y los comentarios de las imágenes posteriores en el directorio del ordenador del usuario.Para comenzar la imagen 3D, utilice el asistente de imagen para seleccionar la sonda reportera de luciérnaga. En la ventana de bioluminiscencia delit, seleccione siguiente y aparecerán en pantalla seis selecciones espectrales que se adquirirán; seleccione adquirir secuencia y las imágenes se tomarán utilizando los ajustes respectivos bajo la pestaña de topografía superficial. En la paleta de herramientas, enmascare la fotografía para ajustarla al contorno del animal.Para crear una malla reconstruida de la topografía superficial del animal, vaya a la pestaña de reconstrucción 3D de DLI en la paleta de herramientas y seleccione las adquisiciones de imagen adecuadas para la reconstrucción de la señal. Asegúrese de que el músculo esté listado bajo propiedades del tejido y la luciérnaga bajo el espectro de la fuente. Haga clic en reconstruir en la pestaña analizar y deberían aparecer la reconstrucción 3D de la superficie del animal y la reconstrucción correspondiente de la fuente de la señal.El análisis de datos puede comenzar después de que se adquiere y guarda la imagen; acceda al archivo del programa haciendo clic en el botón de búsqueda y seleccionando el archivo. La información de la imagen se puede encontrar en ver información de la imagen. Cuantifique la intensidad de la señal seleccionando el botón de herramientas de la región de interés o ROI.Asegúrese de que la imagen se analice en modo de fotones seleccionando la opción de fotón. En la lista desplegable situada en la esquina superior izquierda del panel de control de imagen, seleccione el botón de ROI de medición en la lista desplegable de tipo y elija la forma de ROI de interés. Las opciones incluyen círculo, cuadrado y/o cuadrícula.Establezca la posición de la ROI arrastrando la selección de forma de ROI hasta la región que contiene la señal de bioluminiscencia. Asegúrese de cubrir todas las áreas de intensidad en la imagen adquirida. Finalmente, haga clic en el botón de medición para calcular la intensidad de la señal de la ROI.Se muestra la etiqueta de ROI. La intensidad del implante celular exitoso es evidente cuando las células implantadas son detectables mediante imágenes de bioluminiscencia el día de la cirugía, independientemente de si las células han sido transfectadas con el gen luc o luc2. Este gráfico registra el crecimiento de las células tumorales GL261-luc en un ratón albinos C57BL/6; la bioluminiscencia se midió cada tres días y se representó como conteo in vivo de fotones frente a los días posteriores al implante.Las fotografías muestran la bioluminiscencia en diferentes puntos temporales. La coloración indica bioluminiscencia, que es proporcional al número de células tumorales. Los animales son sacrificados al presentarse enfermedad o mal estado de bienestar.Aunque no es una parte estándar de estos análisis, se puede diseccionar el cerebro y se puede añadir Lucifer tópicamente para obtener la imagen ex vivo. Esto debe hacerse inmediatamente después de sacrificar al animal porque la reacción de bioluminiscencia requiere ATP. Este gráfico compara los conteos de fotones obtenidos de tumores resultantes de células GL 2 6 1 lux frente a células GL 2 6 1 L dos. Los resultados de un promedio de cinco animales muestran que el gen L dos proporciona un mayor nivel de bioluminiscencia.Esta siguiente figura muestra múltiples vistas de una reconstrucción tridimensional de la implantación intracraneal de células GL 2 6 1 L dos, coregistrada con el esqueleto y el cerebro del ratón. También se realizó una comparación cinética entre inyecciones subcutáneas e intraperitoneales; tres minutos después de la inyección de Lucifer, el ratón fue sedado y se realizó imágenes cada tres minutos durante una hora y cada seis minutos posteriormente, para generar una curva cinética de bioluminiscencia. Como se muestra aquí, una vía de administración subcutánea de Lucifer, indicada en rojo, es superior a una inyección intraperitoneal mostrada en negro, y el momento óptimo para imaginar a los animales es aproximadamente 25 minutos tras la inyección de Lucifer.Una vez dominada, la técnica quirúrgica puede realizarse en una hora si se lleva a cabo correctamente. Tras este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como resonancia magnética (MRI) o imágenes fluorescentes, con el fin de responder preguntas adicionales. Por ejemplo, si existe edema alrededor del tumor o qué otros cambios moleculares o bioquímicos están ocurriendo dentro y alrededor del tumor.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar una implantación intracraneal y la imagenología tridimensional in vivo de células de glioma mire.

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Fuente: Clark, A.J., et al. Imágenes de bioluminiscencia de un modelo animal inmunocompetente para el glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Este video muestra imágenes de bioluminiscencia para rastrear la progresión del glioblastoma en un modelo de ratón inmunocompetente, utilizando células tumorales que expresan luciferasa y luciferina para cuantificar el crecimiento tumoral de forma no invasiva.

Imágenes de bioluminiscencia de un modelo de ratón inmunocompetente para el glioblastoma

Hemos establecido un modelo ortotópico de glioblastoma cortical en ratones para intravital microscopía de dos fotones que recapitula las limitaciones biofísicas normalmente en juego durante el crecimiento del tumor. Una ventana de cristal crónica reemplazando el cráneo por encima de la del tumor permite el seguimiento de la progresión del tumor con el tiempo por microscopía de dos fotones.

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GL261 proporcionan un modelo animal inmunocompetente útil de glioblastoma. Los objetivos de este protocolo son demostrar las técnicas adecuadas para monitorizar el crecimiento tumoral intracraneal mediante imágenes de bioluminiscencia in vivo, y verificar la utilidad de las células GL261 modificadas con luciferasa para el estudio de la inmunología tumoral y los enfoques inmunoterapéuticos para el tratamiento del glioblastoma.

La bioluminiscencia de imágenes de un Modelo inmunocompetentes Animal para Glioblastoma

Ortotópico inyección intracraneal de células del tumor se ha utilizado en la investigación del cáncer para el estudio de la biología del tumor de cerebro, evolución, evolución y respuesta terapéutica. Presentamos la tomografía molecular fluorescencia de xenoinjertos tumorales, que proporciona en tiempo real imágenes intravital y cuantificación de un tumor masivo en modelos preclínicos de glioblastoma.

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La microdisección láser (LMD) es una técnica sensible y altamente reproducible que se puede utilizar para descubrir vías que median la heterogeneidad e invasión del glioma. Aquí, describimos un protocolo optimizado para aislar áreas discretas del tejido glioma usando LMD láser seguido de análisis transcriptomático.

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Describimos el trasplante intraparenquimatoso de células progenitoras neurales humanas transducidas con un vector informador dual que expresa la proteína fluorescente verde luciferasa (GFP) en el cerebro del ratón. Después del trasplante, la señal de luciferasa se mide repetidamente utilizando bioluminiscencia in vivo y células injertadas que expresan GFP identificadas en secciones cerebrales mediante microscopía de fluorescencia.

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