Name: Un protocolo para la detección y borrado en fase gaseosa radicales libres en el humo del cigarrillo Mainstream (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Aprende a medir radicales libres en humo de tabaco mediante espectroscopía ESR con trampa de espín. Evalúa la capacidad de antioxidantes vegetales para eliminar estos compuestos dañinos y reduce los efectos nocivos del tabaquismo.

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Este trabajo fue apoyado por el Instituto Nacional de Salud, la concesión N º NIH / CNRR P41-RR 016 292 (para ACERT).

1. Materiales Todos los disolventes utilizados en este trabajo fueron de grado reactivo. La trampa de la vuelta, incluyendo N-terc-butil-α-phenylnitrone (PBN) y la etiqueta de giro estándar de 2,2,6,6-tetrametil-1-piperinyoxyl (TEMPO) se obtuvieron de Sigma y se utilizaron tal como se suministra. Los antioxidantes de plantas se obtiene comercialmente a partir de Swanson EE.UU., Inc.. 2. Preparación del humo del cigarrillo y el análisis de los radicales libres <ol><li> Para introducir antioxidantes en el filtro, el pycnogenol antioxidantes y extracto de semillas de uva fueron disueltos en etanol al 95%, mientras que el licopeno se disolvió en acetona. Los volúmenes de disolventes fueron diferentes dependiendo de la solubilidad antioxidante. </li><li> La cantidad de antioxidantes de 0,4 mg / filtro se utilizó. Que se revistieron con 10 mg de carbón activado. Para ello el carbón activado se agitó durante ~ 12 horas con la solución antioxidante en condiciones anaeróbicas, se filtra y se seca al vacío. </li> Los antioxidantes se introdujeron entonces en el filtro de acetato convencional (CA filtro). Para ello, el filtro se cortó en dos pedazos. La cubierta de plantas antioxidantes se inserta entre dos piezas del filtro y se envuelve con un trozo de cinta para formar un filtro - antioxidantes filtro sandwich (Fig. 1A). Este filtro combinado se unió posteriormente a las barras de cigarrillos que contengan tabaco. El control de filtro se realizó en la misma forma que el filtro antioxidante excepto que no se añadió antioxidante. <li> Antes de la simulación de fumar, los cigarrillos de investigación fueron desempaquetado y se mantienen en un ambiente de humedad constante (20 ° C, 60% de humedad relativa) utilizando una solución saturada de NaBr por un mínimo de 2 días. </li><li> Simulación de fumar para análisis de rutina se realizó a temperatura ambiente usando un dispositivo de fumar de un solo puerto que, como se muestra en la Fig. 1, consiste en un aspirador de agua o GAST DOA-P104-BN bomba de vacío / compresor de aire (Benton Harbor, Michigan) conectado con el giro que atrapanmontaje a través de un cruce con un extremo abierto. Bocanadas se llevaron a cabo conectando el extremo abierto que se mantuvo abierta entre calada y calada. El flujo de gas se comprobó mediante medidor de flujo y se fijó en ~ 2.2 SCFH = 17,5 ml / s mediante el ajuste de una válvula situada entre la bomba y el ano. </li><li> Los cigarrillos se fumaban la investigación bajo la condición de volumen bocanada de 35 ml con una duración de 2 segundos repite cada 60 segundos, similar a 1. Simulación de fumar para la estimación cuantitativa de los radicales libres en fase gaseosa se llevó a cabo en conjunción con el sistema de captura de giro como se muestra en la fig. 1. </li><li> Diez inhalaciones intensas (35 ml / puff) fueron tomadas por cada cigarrillo. Fase gaseosa de los radicales libres fueron recogidos por pasar la MCS a través de una plataforma de Cambridge filtro y se introduce en la solución de captura de giro (0,05 M PBN en benceno, 2,0 ml). </li><li> Después de la última dosis, la solución de captura de burbujas se reajustó a su volumen inicial (2,0 ml) con el benceno mismo. Una alícuota fue trasladado en un 25 ~0 mm de largo, 3 mm de diámetro del tubo de vidrio sellado en un extremo. </li><li> La solución de captura fue desoxigenada mediante un procedimiento de congelación y descongelación de la bomba. Que se congeló en nitrógeno líquido, y el vacío fue aplicado. Luego fue descongelado en atmósfera de argón, lo que permite burbujas de gas se escape, y se congela de nuevo. Después de este ciclo se repitió tres veces, el tubo se llama sellado al vacío y se utiliza en más medidas de ESR. Este paso es necesario porque el oxígeno, que es muy soluble en benceno, amplía las líneas de ESR de radicales orgánicos. Desoxigenación mejora considerablemente la relación señal-ruido. </li><li> X-Band ESR espectros se registraron en un espectrómetro Bruker EMX a una frecuencia de 9,34 GHz en condiciones normales. Los ajustes del espectrómetro utilizado en la mayoría de los experimentos fueron: el jardín central 3312.5G, escanear ancho 80G, la modulación de amplitud 0,5 G, la constante de tiempo 82 microsegundos, tiempo de exploración 40 seg. </li><li> Los aductos trampa de giro son relativamente estables en las condiciones del experimento, que en algunos casos reqle pedirá otra vez 25 acumulaciones, que normalmente se ~ 20 min. Sin embargo, después de 12 horas la intensidad de las señales de ESR en una solución de benceno disminuye en un factor de ~ 5. </li><li> Para cuantificar la concentración de la aducción de trampas, sus iniciales de la primera derivada del espectro de ESR se ha integrado. El espectro de absorción resultante muestra un fondo singlete amplio, muy probablemente debido a los productos de hollín / alquitrán contenidos en el humo. Después de la sustracción de estos antecedentes, el trío separado del aducto de captura se ha integrado una vez más (Fig. 2). </li></ol> 3. Resultados representante La mayoría de los radicales libres en la quema de cigarrillos de producción de humo (fase gas) son instantáneas e inestable. Con el fin de observar estos radicales una técnica trampa de spin se emplea. Captura fase gaseosa de los radicales libres por su transformación en un aducto de giro que es más estable y puede ser detectado por ESR (Fig. 1). En el presente estudio, la solución de spin-trampa de 0,05M PBN se utilizó para recoger el gas de humo fase de radicales libres, que son una mezcla de radicales de oxígeno, y se centra en carbono que son difíciles de separar 15. En nuestro caso, sin embargo, las constantes hiperfinos observa la división de un N = 13,7 g y 1,95 g H = son muy similares a los valores correspondientes para la captura de aductos de alcoxilo los radicales libres (Romanos) 2, lo que sugiere que son el producto principal. Hemos demostrado que las señales débiles ESR y reproducibilidad baja observada en nuestras mediciones iniciales (Fig. 2) se debieron a la humedad en el flujo de humo. Para resolver este problema, hemos añadido un nitrógeno líquido (LN2) trampa entre el filtro de Cambridge y la solución spin trampa. La LN 2 trampa elimina el agua del flujo de MCS de congelación rápida y la captura en la pared interior del tubo de vidrio. Esto mejoró las señales de ESR y ha permitido resultados altamente reproducibles (Fig. 3). La cantidad de radicales libres atrapados se determinó utilizando unmuestra de referencia. Para las muestras de control sin antioxidantes, la concentración de benceno en el aducto típicas estimadas por comparación de su espectro integral doble con un espectro integral doble de concentración conocida de TEMPO fue de 1,24 M (Fig. 2). Dado que la cantidad de aire que pasa a través de cada cigarrillo se fuma fue de ~ 350 ml, lo que da una estimación de la concentración de radicales libres en la fase gaseosa de MCS de 7.1X10 ~ -9 M, y un número total de radicales atrapados de la fase gaseosa de un cigarrillo entero de 1.5x10 ~ 15. Una estimación de la cantidad total de los radicales libres en el humo de un cigarrillo entero, incluyendo tanto el gas y la fase de partículas, fue ~ 10 16 radicales libres 9. Los diferentes niveles del efecto de barrido de la planta de antioxidantes sobre los radicales libres en fase gaseosa del humo del cigarrillo corriente principal se observaron. Sus tasas de recolección de residuos se presentan en la figura. 4. Licopeno y extracto de semilla de uva mostraron las tasas más altas mientras que los bajoser tasa se observó para el Pycnogenol (Fig. 4). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Un diagrama de un mejor diseño de simulación de fumar para la recogida de fase gas-radicales libres en el humo del cigarrillo convencional (MCS) con trampa de spin. MCS fue dibujado por un aspirador de agua a través de CA filtro, filtro de Cambridge (filtro amarillo) y pasa a través de una trampa de nitrógeno líquido para eliminar el H 2 O. Los productos en fase gaseosa, finalmente fue a girar trampa y burbujea a través de la solución trampa giro. Antioxidantes planta fue colocada entre dos piezas de filtros de acetato convencional (ampliada en el círculo A) conectado a los cigarrillos para eliminar los radicales libres en el MCS. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Una estimación cuantitativa de la concentración de aducto spin-captura en benceno requiere restar una señal de fondo amplio de la primera integraciónl espectro. Los parámetros de interacción hiperfina para el aducto spin-trampas son una H = 1,95 g, un N = 13,7 g. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Pasando a través de LN2 trampa mejora sustancialmente la calidad de las señales de ESR obtenidos por spin-captura de MCS. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig4.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Efecto de los antioxidantes naturales de la concentración de radicales libres en el MCS. La intensidad relativa de la señal son: control - 100%, el Pycnogenol - 55%, extracto de semilla de uva - 12%, el licopeno - un 10%.

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</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Una estimación fiable del efecto de diferentes de radicales libres en el humo del tabaco requiere de una técnica reproducible para la detección cuantitativa de los radicales libres. Previamente 1, se ha demostrado que pequeñas cantidades de soluciones de mayor concentración de la trampa de espín en solventes no polares son más eficaces para atrapar los radicales libres del humo del tabaco. El humo del cigarrillo siempre contiene vapor de agua de la combustión de compuestos orgánicos y la humedad residual en tabaco, que pueden terminar en la captura de disolventes. Esta mezcla de agua en la solución trampa PBN giro disminuye sustancialmente el tiempo de vida de los aductos de giro de captura y la intensidad de sus señales de ESR. La eliminación de esta humedad por simple MCS pasa a través de un tubo en forma de U enfriado con nitrógeno líquido mejorado dramáticamente la calidad de los espectros de ESR en nuestros experimentos, a pesar de que alguna fracción de los radicales en fase gaseosa también podría ser atrapado en la superficie congelada. Con tsu técnica se comparó la eficacia relativa de los diferentes radicales de barrido compuestos naturales introducidos en los filtros de cigarrillos. Encontramos que el licopeno y extracto de semilla de uva inmediatamente después de la incorporación en los filtros de cigarrillos son capaces de recoger hasta el 90% de los radicales libres del MSC en fase gaseosa. Como de alta capacidad de barrido filas de estos compuestos naturales barata disponible entre las más eficientes informó protectores de los radicales libres como la hemoglobina y shikonine 8,14. Sin embargo, en nuestros filtros de cigarrillos cargados con experimentos estudiaron los antioxidantes naturales perdido una parte notable de su capacidad de recolección de residuos después de una semana de almacenamiento a temperatura ambiente. La solución de este problema se puede estimular la futura aplicación de licopeno y extracto de semilla de uva en los filtros de cigarrillos comerciales.

un protocolo para la detección y borrado en fase gaseosa radicales libres en el humo del cigarrillo mainstream

A Protocol for Detecting and Scavenging Gas-phase Free Radicals in Mainstream Cigarette Smoke

El consumo de cigarrillos está asociado con cánceres humanos. Se ha informado que la mayoría de las muertes por cáncer de pulmón son causados ​​por fumar cigarrillos 5,6,7,12. A pesar de los alquitranes del tabaco y productos relacionados en la fase de partículas del humo del cigarrillo son las principales causas de enfermedades relacionadas con carcinógenos y mutágenos, humo de cigarrillo contiene cantidades significativas de los radicales libres que también se consideran como un importante grupo de carcinógenos 9,10. Los radicales libres atacan los componentes celulares de la estructura de proteínas dañinas, los lípidos y las secuencias de ADN y aumentar el riesgo de desarrollar varios tipos de cánceres. Los radicales se inhala produce aductos que contribuyen a muchos de los efectos negativos para la salud del humo del tabaco en el pulmón 3. Se han realizado estudios para reducir los radicales libres del humo del cigarrillo para disminuir los riesgos de los daños inducidos por el tabaco. Se ha informado de que la hemoglobina y hemo-compuestos que contienen en parte podría limpiar el óxido nítrico, reactivaoxidantes y cancerígenas nitrosocompuestos volátil de 4 humo del cigarrillo. Un &quot;filtro biológico&quot; consistió en la hemoglobina y el carbono activado se utiliza para limpiar los radicales libres y de eliminar hasta el 90% de los radicales libres del humo del cigarrillo 14. Sin embargo, debido a la falta de efectividad de costos, no se ha comercializado con éxito. Otro estudio mostró un buen rendimiento de barrido de shikonin, un componente de la medicina china a base de hierbas 8. En el presente estudio, se presenta un protocolo común para la introducción de extractos antioxidantes naturales en el filtro del cigarrillo para eliminar los radicales libres en fase gaseosa del humo del cigarrillo y la medición del efecto de barrido de los radicales libres en fase gaseosa del humo del cigarrillo convencional (MCS) con spin-captura resonancia de spin electrónico (ESR) Espectroscopia 1,2,14. Hemos demostrado gran capacidad de barrido de licopeno y extracto de semilla de uva que podría apuntar a su futura aplicación en los filtros de cigarrillos. Una ventaja importante de estos profesionalespectivos carroñeros es que se puede obtener en grandes cantidades a partir de subproductos de la industria del tomate o el vino, respectivamente, 11,13

Spin-captura de la espectroscopía ESR fue utilizado para estudiar el efecto de la planta de antioxidantes licopeno, pycnogenol y el extracto de semilla de uva en la recolección de residuos en fase gaseosa radicales libres en el humo del cigarrillo.

Un protocolo para la detección y borrado en fase gaseosa radicales libres en el humo del cigarrillo Mainstream

El consumo de cigarrillos está asociado con cánceres humanos. Se ha informado que la mayoría de las muertes por cáncer de pulmón son causadas por el consumo de cigarrillos 5,6,7,12. ...

El objetivo general de este procedimiento es medir la cantidad de radicales libres en el humo principal del tabaco y evaluar la capacidad de captación de varios antioxidantes. Esto se logra primero preparando filtros que contienen varios compuestos captadores diferentes, así como controles sin filtro captador. A continuación, se realiza una simulación de fumado con el humo de cigarrillos de investigación, que pasa a través de una solución de captación de espines.La resonancia de espín electrónico, abreviada como ESR, se utiliza entonces para registrar espectros de radicales atrapados así como de muestras de referencia. A continuación, los espectros de ESR obtenidos se someten a un análisis rutinario con el fin de separar la señal de los radicales atrapados en fase gaseosa del fondo y cuantificar la concentración de radicales mediante una muestra de referencia. En última instancia, los resultados muestran información cuantitativa sobre el contenido de radicales libres en el humo principal del cigarrillo y estimaciones de la capacidad de captación de antioxidantes naturales mediante espectroscopía de ESR con captación de espín.La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes de análisis del humo del tabaco, como la cromatografía de gases, es que la RES es especialmente sensible a los radicales libres. Las implicaciones de esta técnica pueden ayudar a reducir los efectos peligrosos del humo del tabaco, ya que los radicales libres constituyen un grupo importante de carcinógenos. Este método puede aportar información valiosa para el estudio de radicales libres en el humo del tabaco, y también puede aplicarse a otros sistemas, como el humo industrial y el humo de segunda mano. El Centro Nacional de Investigación Biomédica para la tecnología de resonancia de espín electrónico, también conocido como cert, es un derivado de nuestra amplia experiencia en el desarrollo de tecnología moderna de RES.Para los investigadores dedicados a la resonancia de espín electrónico, ofrecemos una amplia variedad de servicios para ellos y para la comunidad biomédica. Ponemos a disposición nuestras instalaciones regularmente para introducir antioxidantes en el filtro del cigarrillo. Primero, disuelva los antioxidantes, pirogenol y extracto de uva en etanol al 95 % y disuelva licopeno en acetona.Ajuste los volúmenes del disolvente según la solubilidad de los antioxidantes. A continuación, combine los antioxidantes disueltos con carbón activado agitando en condiciones anaerobias durante aproximadamente 12 horas. Se logran condiciones anaerobias haciendo burbujear Argonne a través de la mezcla mientras se agita.Tras la incubación, filtre la solución y seque al vacío. A continuación, introduzca los antioxidantes y el carbono en un filtro de acetato convencional cortando primero el filtro en dos piezas. Inserte los antioxidantes vegetales recubiertos entre dos piezas del filtro para formar un sándwich de filtro con antioxidantes, y vuelva a insertarlo en el cilindro de papel del cigarrillo.Prepare el filtro de control de la misma manera que el filtro antioxidante, excepto que no debe agregar el antioxidante antes del montaje experimental. Los cigarrillos de investigación deben desempacarse y mantenerse en un ambiente de humedad constante utilizando una solución saturada de bromuro de sodio durante un mínimo de dos días. Recupere las varillas de cigarrillo que contienen tabaco y conéctelas al filtro combinado.Realice una simulación de fumado para análisis de rutina a temperatura ambiente utilizando un dispositivo de fumado de un solo puerto, que consiste en un eyector de agua o una bomba de vacío o compresor de aire conectado al ensamblaje de captura de espín a través de una unión en T con un extremo abierto. Utilice un medidor de flujo para verificar el flujo de gas y ajústelo a aproximadamente 2,2 pies cúbicos estándar por hora regulando una válvula colocada entre la bomba y la salida de ventilación. Fume los cigarrillos de investigación con volúmenes intensos de 35 mililitros durante dos segundos y repita cada 60 segundos.El extremo abierto del dispositivo para fumar debe taparse para realizar caladas y dejarse abierto entre caladas. Mientras el extremo está destapado, hay poca corriente de aire a través del cigarrillo, lo que corresponde a las condiciones entre caladas. Realice 10 caladas intensas por cada cigarrillo, recolectando los radicales libres en fase gaseosa haciendo pasar el humo principal del cigarrillo a través de una almohadilla de filtro Cambridge y luego introduciéndolo en la solución de captura de radicales. La trampa de nitrógeno líquido elimina el vapor de agua del humo principal, pero no afecta sustancialmente los radicales en fase gaseosa. Después de la última calada, transfiera una alícuota de la solución de captura burbujeada a un tubo de muestra de vidrio de aproximadamente 25 cm de largo y tres milímetros de diámetro interno. Dado que el oxígeno ensancha los espectros de RPE y disminuye la sensibilidad del método, desoxigene la solución utilizando el método de congelación, bombeo y descongelación: primero sumerja el tubo en nitrógeno líquido, luego evacúe la solución con una bomba de aceite y a continuación descongele la solución bajo argón.Repita este método de congelación, bombeo y descongelación varias veces. A continuación, selle el tubo al vacío. El tubo ya está listo.Para mediciones adicionales de RES, registre espectros de RES en banda X en un espectrómetro Bruker EMX a una frecuencia de 9,34 gigahercios. Bajo condiciones estándar, consulte el protocolo escrito para conocer los ajustes típicos del espectrómetro utilizados. Para estos experimentos, realice 25 acumulaciones de RES, lo que normalmente toma aproximadamente 20 minutos.Aunque las trampas de espín son relativamente estables bajo las condiciones experimentales tras 12 horas, la intensidad de las señales de RPE en solución de benceno disminuyó en un factor de cinco. Para cuantificar la concentración del aducto atrapado, integre el espectro inicial de RPE de primera derivada. El espectro de absorción resultante muestra un fondo ancho de singlete, probablemente debido a productos de hollín y alquitrán presentes en el humo.Tras la sustracción de este fondo, integre el triplete separado del adicto al atrapamiento. Una vez más, para obtener la concentración del radical libre. Los valores de las integrales dobles para la solución de atrapamiento de espines se comparan con los de una solución de un radical nitroxilo tempo con concentración conocida del experimento aquí demostrado, así como con cálculos adicionales encontrados en el protocolo escrito.Se obtuvo una concentración de radicales libres en la fase gaseosa del humo principal del cigarrillo de aproximadamente 7,1 veces 10 a la menos nueve molar. A partir de esto, se determinó que el número total de radicales atrapados de la fase gaseosa de un cigarrillo completo es de alrededor de 1,5 veces 10 a la 15. Durante este experimento, las mediciones iniciales condujeron a señales débiles de RES y baja reproducibilidad debido a la humedad en el flujo de humo.Para resolver este problema, se añadió una trampa de nitrógeno líquido al dispositivo de simulación del humo entre el filtro de Cambridge y la solución de captura de espines. La trampa de nitrógeno líquido eliminó el agua del flujo de humo principal del cigarrillo mediante congelación rápida y la atrapó en la pared interna del tubo de vidrio. Esto mejoró considerablemente las señales de RES y permitió obtener resultados altamente reproducibles.Se observaron diferentes niveles del efecto de eliminación de antioxidantes vegetales sobre radicales libres en fase gaseosa del humo principal del cigarrillo, y se presentan sus tasas de eliminación. El licopeno y el extracto de semilla de uva mostraron las tasas más altas, mientras que para el pycnogenol se observó una tasa más baja. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en menos de una hora si se lleva a cabo correctamente.Una vez que se realiza el procedimiento, es importante hacer pasar el humo a través de una trampa de nitrógeno líquido. Esto mejora la calidad del espectro SR y la reproducibilidad una vez desarrollado. La técnica ayudó a los investigadores en salud y medio ambiente a explorar y detectar la presencia de radicales libres que representan un riesgo para la salud en diversos compuestos volátiles.Después de ver el video, debería tener una buena comprensión de cómo cuantificar los radicales libres en el humo principal del tabaco con el fin de reducir los efectos peligrosos del consumo de tabaco.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Células epiteliales pulmonares pueden ser aislados de las vías respiratorias de los ratones y se cultivan en la interfaz aire-líquido como un modelo de epitelio respiratorio diferenciados. Un protocolo es descrito para el aislamiento, el cultivo y la exposición de estas células al humo del cigarrillo convencional, con el fin de estudiar la respuesta molecular a esta toxina ambiental.

Aislamiento de ratón las células epiteliales respiratorias y la exposición al humo del cigarrillo Experimental de la interfaz de aire líquido

Radical basado en la química biomimética ha sido aplicada a bibliotecas de hasta edificio-necesarias para el desarrollo de biomarcadores.

Radicales Libres en Biología Química: del comportamiento químico al desarrollo de biomarcadores

El objetivo de este protocolo es exponer modelos organotípicos de tejido bronquial y nasal en 3D humanos al humo de cigarrillo (CS) convencional en la interfaz aire-líquido. A continuación, se investiga el impacto de la CS en los tejidos mediante un ensayo de actividad del citocromo P450, una medición del latido de los cilios y un enfoque de biología de sistemas.

Evaluación del Impacto de la exposición repetida de Organotípicos 3D bronquiales y nasales Modelos Tissue Culture Whole humo del cigarrillo

Utilizando ensayos ex vivo optimizados de células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC), demostramos que una preparación de productos de tabaco combustible suprime marcadamente las citocinas secretadas intracelularmente mediadas por receptores y la capacidad citolítica de las PBMC efectoras. Estos ensayos rápidos pueden ser útiles para la evaluación de productos y la comprensión de los posibles efectos a largo plazo de la exposición al tabaco.

Métodos para evaluar la citotoxicidad y la inmunosupresión de Combustible Tabaco Preparativos del producto

El objetivo del estudio fue evaluar el impacto biológico de 15 componentes del humo de cigarrillo utilizando una combinación de un analizador de células en tiempo real basado en impedancia y una plataforma basada en cribado de alto contenido (HCS) para la evaluación toxicológica in vitro. Este estudio proporciona información sobre las dosis efectivas, la toxicidad y los modos de acción de los compuestos probados.

Análisis alta Content Screening para evaluar los efectos toxicológicos de nocivo Componentes y potencialmente perjudicial (HPHC)

Este protocolo describe un método para exponer roedores al vapor de cigarrillo electrónico (vapor E) y al humo del cigarrillo. Las cámaras de exposición se construyen modificando las cámaras de anestesia con un sistema de bombeo automatizado que suministra vapor E o humo de cigarrillo a los roedores. Este sistema se puede modificar fácilmente para acomodar muchos puntos finales experimentales.

Comparación de los efectos del vapor de cigarrillo electrónico y el humo del cigarrillo en una novela<em&gt; In Vivo</em&gt; Sistema de exposición

Aquí, describimos un aparato de laboratorio programable que puede utilizarse para crear extractos de aerosol de humo y electrónicos del cigarrillo del cigarrillo convencional. Este método proporciona una herramienta útil para hacer comparaciones directas entre cigarrillos convencionales y los cigarrillos electrónicos y es un punto de entrada accesibles a la investigación de cigarrillo electrónico.

Un microcontrolador funciona dispositivo para la generación de extractos líquidos de Aerosol de humo y electrónicos cigarrillo cigarrillo convencional

Los usuarios del cigarrillo electrónico (e-cig) están aumentando en todo el mundo. Sin embargo, poco se conoce efectos sobre la salud inducidos por aerosoles inhalados e-cig. Este artículo describe una técnica de generación de e-cig aerosol apto para exposiciones de animales y estudios toxicológicos posteriores. Tales protocolos deben establecer sistemas de exposición experimental reproducible y estandarizado e-cig.

Generación del Aerosol del cigarrillo electrónico por un dispositivo de Vaping máquina de tercera generación: aplicación a estudios toxicológicos

Describimos aquí métodos para la cuantificación sensible y precisa de las lesiones 8-oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine (8-oxodGuo), 1,n6-etheno-2'-deoxyadenosine (1,n6-dado) y 1,n2- etheno-2'-desoxyguanosine (1,N2-DGUO) en el ADN. Los métodos se aplicaron a la evaluación de los efectos de las partículas finas ambientales (PM2,5) en los tejidos (pulmón, hígado y riñón) de ratones expuestos A/J.

Cuantificación de tres lesiones de ADN por espectrometría de masas y evaluación de sus niveles en los tejidos de los ratones expuestos a la materia particulada fina ambiental

Este protocolo demuestra el estudio de los efectos patofisiológicos del humo de cigarrillo (CS) con un sistema de la exposición de la inhalación del entero-cuerpo (WBI) (WBIS) construido internamente. Este sistema puede exponer a los animales al CS bajo condiciones repetibles controladas para la investigación de efectos CS-mediados sobre enfisema y hematopoyesis del pulmón.

Exposición al humo del cigarrillo en ratones usando un sistema de inhalación de todo el cuerpo

Aprende a medir radicales libres en humo de tabaco mediante espectroscopía ESR con trampa de espín. Evalúa la capacidad de antioxidantes vegetales para eliminar estos compuestos dañinos y reduce los efectos nocivos del tabaquismo.

Un protocolo para la detección y borrado en fase gaseosa radicales libres en el humo del cigarrillo Mainstream

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