Name: Generación de las Culturas Raft organotípicos de queratinocitos humanos primarios (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Aprende a generar cultivos raft organotípicos de queratinocitos humanos primarios para estudiar diferenciación epitelial y virus. Este método permite analizar interacciones virus-hospedador en condiciones similares a in vivo.

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Los autores desean agradecer a Sally Roberts (Universidad de Birmingham, Birmingham, Reino Unido) para la especie de regalo del anticuerpo E1E4. Este trabajo fue apoyado por una subvención del Instituto Nacional del Cáncer (4R00CA137160-03).

1. Preparación para las Culturas Raft organotípicos <ol><li> Las rejillas balsa de metal mucho primero se trata con ácido crómico sulfúrico para eliminar cualquier residuo que pudiera interferir con el proceso de diferenciación. Sumergir rejillas metálicas en un vaso de precipitados de vidrio que contenía ácido sulfúrico durante una hora, a continuación, de forma continua durante la noche enjuaga con agua del grifo. Después de la noche a la mañana enjuague, las redes de balsas debe enjuagarse durante 3-5 horas en agua doblemente destilada. </li><li> Para prestar apoyo a las balsas, doble tres lados de la balsa de 0,5 cm en la misma distancia el uno del otro. Las rejillas de metal, entonces deben ser esterilizados en autoclave. </li><li> Preparar el tampón de reconstitución 10 veces mediante la adición de 2,2 g de NaHCO3 y 4,8 g de Hepes. Disolver en 100 ml de 0,05 M de NaOH. Filtrar esterilizar y almacenar en alícuotas de 5 ml a -20 ° C. </li><li> Prepare el 10 veces DMEM sin bicarbonato de sodio. Filtrar esterilizar y almacenar en alícuotas de 5 ml a -20 ° C. </li><li> Preparar el factor de crecimiento epidérmico del ratón: Disolver 100 mg de EGF y 10 mg de BSA cada en 10 ml de agua desionizada ddH 2 0. Combinar EGF y BSA y añadir a 80 ml ​​de agua desionizada ddH 2 0 para un volumen total de 100 ml. Filtrar a esterilizar, alícuota (5 ml) y en la tienda de -20 ° C. Para cada litro de medio E añadir 5 ml de 1 mg / ml de EGF (concentración final de 5 ng / ml). </li></ol> 2. Preparación de geles de colágeno <ol><li> Un gel de colágeno se requiere para cada balsa. El colágeno se debe mantener en hielo para evitar que se solidifique. Cada gel de colágeno requiere 3 ml de mezcla de colágeno que consta de: 2,4 ml de colágeno de tipo frío de cola de rata I (concentración final de 3-4 mg / ml), 0,3 ml de tampón 10X de la reconstitución, 0,3 ml de DMEM 10X and1-2 X 10 6 ratón J2 3T3 fibroblastos como células alimentadoras. Para soluciones de alta concentración de colágeno de cola de rata, se diluye en 0,02 M de ácido acético para conseguir la concentración de trabajo correcta. </li><li> Determinar el número de geles de colágeno (balsas) que se necesita y luego calcular una mezcla maestra de la cantidad de colágeno, reconstit 10 veceslución tampón, 10X DMEM y fibroblastos J2 requerido. Incluir suficiente en cada mezcla maestra para 3-4 geles adicionales debido a la viscosidad del colágeno. </li><li> Para preparar el gel de colágeno, trypsinize los fibroblastos J2 y neutralizar con el medio. Combine todos los fibroblastos y el lugar en un frasco cónico de 50 ml. Cuenta las células para determinar el número de balsas que se pueden hacer. De nuevo, 1-2x10 6 fibroblastos se requieren por gel de colágeno y, por tanto por balsa. Gira a las células a baja velocidad. </li><li> Aspirar el medio de la pastilla de fibroblastos y resuspender en la cantidad apropiada de tampón de reconstitución 10X, 10X DMEM y colágeno para el número de balsas calculados. Añadir el colágeno pasado para evitar que el gel se solidifique demasiado rápidamente. Una vez que el colágeno se añade, mezclar rápidamente, pero con cuidado para evitar la introducción de burbujas en el gel. El gel debe ser de un color naranja rojizo, indicativo de que el pH correcto. Si la mezcla de gel es demasiado amarillo, añadir un par de gotas de 1N, esterilizada por filtraciónNaOH y mezclar suavemente hasta obtener el color correcto. </li><li> Añadir 3 ml de la colágeno: mezcla de fibroblastos a los pocillos de una placa de cultivo de 6 pocillos. La mezcla de colágeno se pipeteó lentamente por el lado de cada pocillo para evitar la generación de burbujas. Colocar la placa en un 37 ° C tejido incubadora cultura y dejar que se solidifique durante 30 minutos. </li><li> Después de 30 minutos, añadir 3 ml de medio de E con EGF a la parte superior del gel de colágeno solidificado y devolver la placa a la incubadora. Los geles se deben mantener a 37 ° C durante al menos un día, pero utiliza un plazo de cuatro días. Los resultados óptimos se producen después de dos días de incubación. </li></ol> 3. Los queratinocitos Preparación para la diferenciación <ol><li> Queratinocitos de bajo pasaje debe ser aumentado a aproximadamente el 70% de confluencia. Cada balsa requiere 1-2x10 6 queratinocitos. Trypsinize los queratinocitos y neutralizar con un medio electrónico con EGF. Cuenta las células para determinar el número de balsas que se pueden hacer. Gira por las células en espe bajaed. Resuspender el precipitado en 1 ml de medio de E junto con la FGE para cada cultivo en balsas calculado. </li><li> Aspirar el medio de los geles de colágeno por la inclinación de la placa de 6 pocillos. Añadir 2 ml de medio fresco E con EGF a cada gel. Para cada gel, añadir cuidadosamente 1 ml de queratinocitos resuspendidos a los 2 ml de medio E ya presente en el pozo. Suavemente pipeta los queratinocitos más el 2 ml de los medios y luego dejar caer gota a gota de nuevo en el gel. Agitar o balanceo de la placa puede resultar en una distribución desigual de las células a un lado del gel de colágeno. Colocar la placa en la incubadora a 37 ° C. </li><li> Las células se cultivan hasta la confluencia, reemplazando el medio E diariamente. Las células son confluentes cuando los cambios en el medio a amarillo un día después de un cambio en el medio. Esto suele tardar entre 2-4 días. Si el medio no ha cambiado por día cuatro, proceder al paso siguiente. </li></ol> 4. Realización de las Culturas Raft <ol><li> Use pinzas estériles para colocar una rejilla metálica balsa de estériles, se inclinó por los lados, En un plato de 10 cm. Aspirar el medio de gel de colágeno. Para aflojar el gel de las paredes del pozo, ir alrededor del perímetro del gel con una espátula estéril usando un movimiento ascendente y descendente. Para quitar el gel de colágeno, incline ligeramente la placa y levantar mediante la colocación de una espátula por debajo. Colocar el gel de colágeno en la rejilla metálica sin generar burbujas entre la rejilla y el gel. Dos geles se pueden colocar en cada cuadrícula. </li><li> Con el fin de hacer una interfase aire-líquido, se añade medio de E sin EGF lentamente a la parte inferior del plato por lo que la rejilla balsa está en contacto con los medios pero el gel de colágeno no lo es. Los medios de comunicación no deben entrar a través de los agujeros en la red. Añadir poco a poco el medio para evitar la generación de burbujas en la red, ya que esto evitará que la diferenciación uniforme. Incubar las balsas a 37 ° C y cambiar el medio de cada dos días manteniendo la interfase aire-líquido. Coseche las balsas después de 14 días. </li></ol> 5. Los resultados representativos Cuando tl protocolo se realiza correctamente con queratinocitos primarios, este procedimiento se traducirá en un epitelio bien diferenciado donde las diferentes capas de la piel son evidentes. Esto se logrará mediante el examen histológico mediante la tinción de las secciones de las culturas balsa de hematoxilina y eosina (H &amp; E), como se muestra en la Figura 1B. Tinción H &amp; E también es útil para examinar la morfología de las balsas y el efecto de los virus o compuestos antivirales sobre la capacidad de las células para estratificar y diferenciar. Por ejemplo, balsas hechas de VPH-inmortalizado queratinocitos humanos primarios (HFK-31) son notablemente más gruesa en comparación con balsas hechas de queratinocitos normales de prepucio humano (HFK), lo que refleja un aumento en la tasa de proliferación y la capacidad de las proteínas del VPH para mantener las células de diferenciación activa en el ciclo celular (Figura 1B) 10. Esto da como resultado la retención de los núcleos a través del epitelio, mientras que los queratinocitos normales salen del ciclo celular en la diferenciación, resultando en una ruptura delenvoltura nuclear. Para examinar más de cerca la diferenciación, inmunohistoquímica se puede realizar para examinar marcadores específicos de diferenciación, incluyendo citoqueratinas, así como involucrina, y filagrina. Citoqueratinas diferentes se expresan en etapas específicas de la diferenciación 7. Como se muestra en la Figura 2, citoqueratina 10 (K10) no se expresa en la capa basal, y se encuentra sólo en las capas suprabasales que consisten en células progresivamente diferenciadores. En las balsas de VPH positivos, la expresión de K10 se retrasa en comparación con la de queratinocitos normales, reflejando la influencia de las proteínas del VPH en la diferenciación de los queratinocitos. Inmunohistoquímica también se puede utilizar para examinar el perfil de expresión de los genes virales. Se muestra en la Figura 3 es una tinción representativa examinar la expresión de la proteína E1 VPH ^ E4, que es una proteína finales cuya expresión está restringida a las capas superiores del epitelio. Como era de esperar, no hay manchas que se observa en las culturas balsa de lo normal Human queratinocitos prepucio. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3668/3668fig1.jpg" /> Figura 1. Un esquema) de un método para la preparación de cultivos organotípicos balsa a partir de queratinocitos primarios o líneas de células epiteliales. B) Hematoxilina y eosina de las culturas balsa organotípicos generados a partir de queratinocitos de prepucio humano de forma estable el mantenimiento de VPH-31 (HFK-31) episomas, o de los queratinocitos normales de prepucio humano (HFK). Las capas epiteliales individuales se identifican, así como el tapón de colágeno. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3668/3668fig2.jpg" /> Figura 2. Citoqueratina 10 (K10) expresión está restringida a las capas suprabasales del epitelio. Inmunohistoquímica se realizó en las secciones transversales de cultivos balsa organotípicos generados a partir de células HFK-31, así como HFKs normales usando un anticuerpo a K10. ADN celular se counterstained con DAPI. Las imágenes fueron capturadas utilizando confmicroscopía de fluorescencia vecinal. Las flechas indican la capa basal del epitelio. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3668/3668fig3.jpg" /> Figura 3. E1 VPH ^ proteína E4 se produce al final de la fase productiva del ciclo de vida viral. Inmunohistoquímica se realizó en las secciones transversales de cultivos balsa organotípicos generados a partir de células HFK-31, así como HFKs normales usando anticuerpos para E1E4. ADN celular se counterstained con DAPI. Las imágenes fueron capturadas utilizando un microscopio de fluorescencia confocal. Las flechas indican la capa basal del epitelio.

<ol><li>Andrei, G., Duraffour, S., VandenOord, J., Snoeck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+raft+cultures+for+investigations+of+virus+growth%2C+pathogenesis+and+efficacy+of+antiviral+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Epithelial raft cultures for investigations of virus growth, pathogenesis and efficacy of antiviral agents.</a> Antiviral Research. 85, 431-449 (2010).</li>
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</ol>

No tenemos nada que revelar.

Se describe aquí un método que puede utilizarse para estudiar la diferenciación epitelial en general, pero también puede ser fácilmente adaptado para estudiar la patogénesis viral, así como la eficacia de la terapéutica potencial. Muchos virus orientar las células epiteliales, ya sea como el sitio primario de la infección, como en el caso de VPH, o en algún punto del ciclo de vida viral, como con herpesvirus. Aunque cada vez más cultivos organotípicos balsa es mucho tiempo, la capacidad de hacer una recapitulación fielm...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre de Reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Cola de Rata colágeno tipo 1 (4-5mg/ml) </td><td> BD Biosciences </td><td> 354236 </td></tr><tr><td> DMEM sin ​​NaHC0 3 </td><td> Invitrogen </td><td> 12100-061 </td></tr><tr><td> NaHC0 3 </td><td> Sigma </td><td> S5761 </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> Calbiochem </td><td> 391338 </td></tr><tr><td> De acero inoxidable rejillas de metal </td><td> Williams y temple Co. </td><td> CR-03063-040-100-S </td></tr><tr><td> E medio 11 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Factor de Crecimiento Epidérmico </td><td> BD Biosciences </td><td> 354010 </td></tr></tbody></table>

generación de las culturas raft organotípicos de queratinocitos humanos primarios

Generation of Organotypic Raft Cultures from Primary Human Keratinocytes

El desarrollo de las culturas organotípicos balsa epiteliales ha proporcionado a los investigadores con un eficiente sistema in vitro que fielmente recapitula la diferenciación epitelial. Hay muchos usos para este sistema. Por ejemplo, la capacidad de crecer cultivos tridimensionales balsa organotípicos de queratinocitos ha sido un hito importante en el estudio de los virus del papiloma humano (VPH) 1. El ciclo de vida del HPV está estrechamente vinculada a la diferenciación del epitelio escamoso 2. Organotípicos culturas balsa epiteliales como se ha demostrado aquí reproducir el ciclo de vida completo del virus del papiloma, incluidos los virus de la producción 3,4,5. Además, estos cultivos presentan lesiones displásicas balsas similares a los observados en la infección in vivo con el VPH. Por tanto, este sistema también puede utilizarse para estudiar los cánceres de células epiteliales, así como el efecto de fármacos sobre la diferenciación de células epiteliales en general. Originalmente desarrollado por Asselineau y Prunieras <shasta&gt; 6 y modificado por Kopan et al. 7, el sistema organotípico epitelial cultivo en balsas ha madurado en un modelo general, la cultura relativamente fácil, que implica el crecimiento de células sobre el colágeno se enchufa mantuvo a una interfase aire-líquido (Figura 1A). Durante el curso de 10-14 días, las células estratificar y diferenciar, formando un epitelio de grosor completo que produce específicos diferenciación-citoqueratinas. Balsas cosechadas se pueden examinar histológicamente, así como por las técnicas estándar de moleculares y bioquímicos. En este artículo, se describe un método para la generación de cultivos primarios balsa de queratinocitos humanos. La misma técnica se puede utilizar con las líneas celulares establecidas epiteliales, y puede ser fácilmente adaptado para su uso con el tejido epitelial de biopsias normales o enfermas 8. Muchos virus objetivo, ya sea el epitelio cutáneo o mucoso, como parte de su ciclo de vida replicativa. En los últimos años, la posibilidad de utilizar culto balsa organotípicoUres como un método de estudio de virus-huésped interacciones celulares se ha demostrado por varios herpesvirus, así como adenovirus, parvovirus, y poxvirus 9. Cultivos organotípicos balsa por lo tanto se puede adaptar para examinar la patogénesis viral, y son el único medio para poner a prueba nuevos agentes antivirales para los virus que no son cultivables en líneas celulares permanentes.

Un<em&gt; In vitro</em&gt; Método para imitar<em&gt; En vivo</emLa diferenciación&gt; epitelial se ha descrito. Muchos virus dirigirse a las células epiteliales como parte de su ciclo de vida del virus, y este método proporciona una manera de examinar el virus: las interacciones del huésped que se asemeja más a lo que ocurre<em&gt; En vivo</em&gt;. Esta técnica se puede utilizar con queratinocitos primarios, líneas celulares establecidas, así como biopsia de tejido normal o enfermo.

Generación de las Culturas Raft organotípicos de queratinocitos humanos primarios

El desarrollo de cultivos de balsas epiteliales organotípicas ha proporcionado a los investigadores un sistema in vitro eficiente que recapitula fielmente...

El objetivo general de este procedimiento es generar cultivos tridimensionales organotípicos a partir de queratinocitos primarios o líneas celulares epiteliales establecidas. Esto se logra primero mediante la elaboración de tapones de colágeno con fibroblastos. A continuación, se siembran células epiteliales en la parte superior de los tapones.Luego, los tapones se transfieren a las rejillas de balsas y se mantienen en una interfase aire-líquido durante 10 a 14 días. En el paso final, se cosechan las balsas. En última instancia, los cambios en la diferenciación epitelial pueden evaluarse mediante análisis histológico o inmunohistoquímico. Este método puede proporcionar información sobre la diferenciación epitelial.También puede aplicarse a otros sistemas, como virus que infectan el epitelio cutáneo o mucoso como parte de su ciclo vital. El procedimiento será demostrado por Dan Anneker, un estudiante de posgrado en mi laboratorio. Primero, vierta ácido sulfocromico en un vaso de precipitados de vidrio e introduzca las rejillas de metal flotantes en el ácido durante una hora.Luego, enjuague continuamente las rejillas durante toda la noche con agua del grifo. Después del enjuague nocturno, enjuague las rejillas durante otras tres a cinco horas en agua doblemente destilada y deje secar las rejillas flotantes. A continuación, doble tres lados de la rejilla flotante, aproximadamente 0,5 centímetros, a igual distancia entre sí, y esterilice las rejillas flotantes en autoclave.Después de preparar el gel de colágeno, se utiliza tripsina para separar los dos fibroblastos y luego se neutraliza la tripsina con medio. Transfiera los fibroblastos a un tubo cónico de 50 mililitros y cuente las células para determinar la cantidad de balsas que pueden prepararse. A continuación, después de centrifugar las células durante cuatro minutos a 244 ×g a temperatura ambiente, aspire el medio del precipitado de fibroblastos y re suspenda las células en una cantidad adecuada de tampón de reconstitución DMEM y colágeno, según el número de balsas calculado.Añada el colágeno al final para evitar que el gel se solidifique demasiado rápido. Una vez que se haya añadido el colágeno, mezcle la solución rápidamente pero con suavidad para evitar la introducción de burbujas en el gel. Si la mezcla del gel es demasiado amarilla, agregue un par de gotas de filtro esterilizado.Una solución normal de hidróxido de sodio. Mezcle suavemente hasta que el gel adquiera un color anaranjado rojizo, indicativo del pH correcto. Ahora, pipetee tres mililitros de la mezcla de colágeno y fibroblastos lentamente por la pared de cada pocillo de una placa de cultivo de seis pocillos, evitando la formación de burbujas, e incube la placa durante 30 minutos a 37 grados Celsius para permitir que el gel se solidifique.Cuando el gel esté sólido, agregue tres mililitros de medio E con EGF sobre el gel de colágeno solidificado y regrese la placa al incubador. Después de cultivar queratinocitos de bajo pase hasta aproximadamente un 70 % de confluencia, se trata con tripsina a los queratinocitos y luego se neutraliza la tripsina con eed. Con EGF, cuente las células para determinar la cantidad de balsas que pueden prepararse.Después de centrifugar las células, resuspenda el sedimento en un mililitro de eed con EGF por cada cultivo de balsa calculado. Ahora, retire el medio de los geles de colágeno inclinando la placa de seis pocillos sobre su costado, y luego agregue dos mililitros de eed fresco con EGF a cada gel. A continuación, agregue cuidadosamente un mililitro de queratinocitos resuspendidos a los dos mililitros de eed ya presentes en cada uno de los pocillos.Pipetee suavemente los queratinocitos junto con los dos mililitros de medio y deje caer gota a gota sobre el tapón de colágeno. Coloque la placa en el incubador a 37 grados Celsius durante dos a cuatro días para permitir que las células crezcan hasta alcanzar la confluencia. Las células están listas cuando el medio cambia a amarillo un día después de haber sido reemplazado, o al cuarto día; utilice pinzas estériles para colocar una rejilla metálica estéril en forma de balsa, con los lados doblados hacia abajo, dentro de una placa de 10 centímetros.Aspire el medio de un gel de colágeno, y luego deslice una espátula estéril alrededor del perímetro del gel con un movimiento hacia arriba y hacia abajo para soltar el gel de los bordes del pocillo. Trasladar el tapón de colágeno desde la placa de seis pocillos hasta la rejilla es la parte más difícil de este procedimiento. Tenga cuidado de deslizar suavemente la espátula debajo del tapón sin partirlo y colóquelo plano sobre la rejilla sin crear burbujas de aire entre el tapón y la rejilla.Posteriormente, puede utilizar una espátula para alisar las partes que se hayan doblado hacia adentro durante este procedimiento. Para retirar el gel, incline ligeramente la placa y coloque la espátula debajo del gel levantándolo. Coloque el gel de colágeno sobre la rejilla metálica sin generar burbujas entre la rejilla y el gel.Para crear una interfase aire-líquido, agregue EED sin EGF lentamente al fondo del recipiente de manera que la rejilla de balsas toque el medio, pero el gel de colágeno no lo haga. Finalmente, incube las balsas a 37 grados Celsius. Manteniendo la interfase aire-líquido, recolecte las balsas después de 14 días. Como se observa en esta figura, las balsas elaboradas a partir de queratinocitos humanos primarios inmortalizados con VPH 31 o Hfk, 30, son notablemente más gruesas en comparación con las balsas hechas a partir de queratinocitos humanos normales de piel o hks.Por lo tanto, las proteínas del VPH tienen la capacidad de mantener activas en el ciclo celular a las células diferenciadas. Aquí, se realizó un análisis inmunohistoquímico en secciones transversales de cultivos tridimensionales generados a partir de HK 30, así como de HKS normales, utilizando un anticuerpo contra la citoqueratina 10 o K 10 en color verde. La K 10 no se expresó en la capa basal indicada aquí por las flechas, sino que se encontró únicamente en las capas suprabasales, que consisten en células que se diferencian progresivamente.En esta figura, se muestra la expresión de la proteína del VPH, E uno, E cuatro, una proteína tardía que se restringe a las capas más superficiales del epitelio y que aquí se representa en verde, tal como se esperaba. No se observa tinción en los cultivos en balsa procedentes de queratinocitos humanos normales, como en la figura anterior.Las flechas indican nuevamente la capa basal del epitelio tras su desarrollo. Esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la biología del cáncer estudiaran la patogénesis de los virus del papiloma humano mediante un sistema que imita la diferenciación epitelial in vivo. Tras ver este video, deberían tener una buena comprensión de cómo elaborar cultivos en balsa organotípicos a partir de queratinocitos primarios o líneas celulares epiteliales establecidas.

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Investigación

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Generación y cultivo de Keratinocytes humanos primarios de piel adulto

Aquí, presentamos un protocolo para generar un modelo 3D organotypic melanoma esferoide piel que recapitula la arquitectura y complejidad multicelular de un órgano, tumor en vivo pero al mismo tiempo acomoda sistemático experimental intervención.

Un modelo de piel Organotypic Melanoma 3D esferoide

Aquí presentamos un protocolo para aislar eficientemente keratinocytes humanos primarios de tejidos de la piel adulta. Este método simplifica el procedimiento convencional mediante el uso de la Y-27632 del inhibidor de la roca en el medio de inoculación separar espontáneamente las células epidérmicas de las células cutáneas.

Un método simplificado y eficiente para aislar Keratinocytes humanos primarios de tejido adulto de la piel

Proponemos un protocolo que muestra cómo distinguir keratinocytes derivados de células madre pluripotentes inducidas y fibroblastos y generar un organoide de piel 3D, usando estos queratinocitos y fibroblastos. Este protocolo contiene un paso adicional de generar un modelo de ratones humanizados. La técnica presentada aquí mejorará la investigación dermatológica.

Generación de 3D piel organoide de cable derivadas de sangre inducida por las células de vástago Pluripotent

Aquí describimos un protocolo para el cultivo sistemático de esferoides epidérmicos en cultivo de suspensión 3D. Este protocolo tiene una amplia gama de aplicaciones para su uso en una variedad de tipos de tejidos epiteliales y para el modelado de varias enfermedades y afecciones humanas.

Establecimiento de un sistema de cultivo de esferoides epidérmicos de alto rendimiento para modelar la plasticidad de las células madre de queratinocitos

Este protocolo describe el cultivo de queratinocitos recién obtenidos (pasaje 0) para su uso en la obtención de imágenes de células vivas.

Generación de cultivos primarios para la obtención de imágenes de células vivas de queratinocitos

Aprende a generar cultivos raft organotípicos de queratinocitos humanos primarios para estudiar diferenciación epitelial y virus. Este método permite analizar interacciones virus-hospedador en condiciones similares a in vivo.

Generación de las Culturas Raft organotípicos de queratinocitos humanos primarios

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