Una técnica simplificada para In situ La escisión de la Córnea y la evisceración del tejido de la retina del globo ocular humano

Hoy estamos demostrando una técnica simplificada para ejercitar la córnea y comer tejido de la retina de un globo ocular humano de donantes cadavéricos. La técnica descrita el año ayudará a ejercitar tejido de buena calidad para ser utilizado con fines de trasplante, quirúrgico, investigación oral sin dañar otros tejidos del globo ocular. Con 18 años de experiencia y Andrés de córnea trasplantada cada año, hemos mantenido un buen nivel de nuestro trabajo mediante el desarrollo de nuevas técnicas y la mejora de nuestra habilidad cada día.

Para conseguirlo, primero ejercitamos la córnea y luego las visuales de la retina. La córnea es un tejido avascular que permite la transmisión de la luz a la retina, y para ello, debe mantener siempre un buen grado de transparencia. La córnea consta de cinco capas, el epitelio, los arcos, la capa, el estroma, la membrana desus y el endotelio.

Si la córnea está dañada, se puede reemplazar con la ayuda de una córnea de un donante adecuado. La coroides es la túnica intermedia entre la esclerótica y la retina, delimitada en el interior por la membrana brusa y es responsable del flujo sanguíneo en el ojo. La evisceración adecuada de la coroides es tan importante como la extirpación de la retina.

La retina ayuda a recibir la luz de la córnea y el cristalino y la convierte en la energía química que finalmente se transmite al cerebro. Con la ayuda del nervio óptico, al ser transparente y delicado, se debe eviscerar sistemáticamente para obtener un tejido de buena calidad. Encienda el armario de flujo de aire lanar.

Limpie la campana de flujo lanar con alcohol isop al 70%. Póngase ropa de protección personal, como gorro quirúrgico, guantes estériles y mangas goner. Utilizando una técnica aséptica, configure el campo estéril colocando una tola estéril y una bandeja de instrumentos preesterilizada.

Abra asépticamente los instrumentos estériles y colóquelos en el campo estéril, evitando cualquier contaminación. Coloque todos los materiales e instrumentos estériles en el campo estéril y coloque frascos de ojos que contengan globos oculares de manera que queden firmes hasta el borde del campo estéril. Para facilitar su uso, etiquete los frascos con un medio de almacenamiento preparado previamente y coloque la tapa de pirometría de poliol yodo sobre el sulfato de sodio y una solución salina estéril de tampón de fosfato.

Fuera de la alimentación estéril, permita que los tejidos oculares y las soluciones alcancen la temperatura ambiente normal, ya que se conservan en refrigeradores a cuatro grados centígrados. Evite los ciclos repetidos de calentamiento o enfriamiento. Retire las miradas y las esponjas del frasco para los ojos con pinzas estériles.

Coloque el globo ocular en el párpado y retire los vendajes adicionales. Elija cuidadosamente el globo ocular con el nervio óptico y sumerja el globo en estéril. IPVP descontaminar los globos oculares en IPVP estéril durante dos minutos.

Transfiera el globo a miluvato de sodio estéril durante un minuto. Transfiera los globos a una solución estéril de línea celular de tampón de fosfato y déjelos hasta que funcione. Trabajando debajo de la campana de flujo de aire lanar, lave y retire el globo ocular del PBS y colóquelo debajo del campo estéril.

Envuelva el globo con esteroides, dejando la córnea y aproximadamente cinco milímetros de esclerótica de la córnea descubierta, el bulbo del ojo podría simplemente sostenerse en la mano. Mantener la presión adecuada con tijeras estériles. Eliminar todos los restos eventuales de la conjuntiva sin dañar la córnea.

Utilice una hoja de bisturí desechable para realizar una incisión escleral de tres a cuatro milímetros de la región del limbo. A continuación, extienda la incisión 360 grados, evitando perforar el tejido uveal subyacente o causar cualquier deformación de la córnea. La curvatura normal corta cuatro incisiones grandes dejando cuatro pequeños espacios, evitando la secreción del cuerpo vítreo.

Los cuatro espacios están cortados, asegurando que no se elimine ningún otro tejido. La presencia de pequeñas placas esclerales puede dificultar el corte, por lo que debe asegurarse de completar la escisión escleral con tijeras de microcirugía. Esta operación debe realizarse sin dañar la retina coroidea ni el cuerpo vítreo.

Inspeccione la incisión para asegurarse de que esté completa. Si la incisión se ha realizado correctamente, el borde escleral cornal se adhiere al cuerpo ciliar solo en el punto en correspondencia con la córnea, coloque el globo ocular costal cerca del centro de la alimentación estéril. Complete la extracción de la córnea con pinzas estériles.

Mantenga el borde escleral inmóvil y extirpe el borde escleral de la córnea lejos del resplandor ocular. Separe suavemente los accesorios restantes del botón escleral de corno. Nunca tire del borde escleral corneal hacia adentro, lo que podría causar tensión corneal cruzada, ni permita que vuelva a caer sobre la cámara anterior.

La densidad de células endoteliales de la córnea se comprueba mediante solución hipotónica y la mortalidad celular mediante tinción de disparo y azul durante aproximadamente un minuto. Retire el viaje y la mancha azul en una gasa de alambre estéril y lave los conios en PBS estéril. Transfiéralo en una placa de Petri estéril llena de solución de sacarosa.

Esta solución ayuda a crear un ambiente hipotónico y ayuda a identificar las células visualmente. A continuación, las células se cuentan bajo un microscopio óptico con un aumento de cien x y se miden como células por milímetro cuadrado. Por lo general, se buscan las células en busca de densidad celular morfológica como bordes intercelulares, polimorfismo, degeneración, distrofia y mortalidad celular.

El grosor de la córnea también es una característica importante para el trasplante, junto con una buena tasa de transparencia de la córnea extirpada. El CLO corneal estéril se utiliza para fijar la córnea en el borde escleral, doblar el CLO corneal para asegurar una apertura del orificio suficiente para bloquear el borde escleral, transferir el borde corneal usando un clavo corneal al almacenamiento corneal previamente preparado, medio preparado a temperatura ambiente. Luego, la córnea debe conservarse a 31 grados SIU durante las cuatro semanas de preservación de la córnea.

El medio de almacenamiento se somete a varias pruebas microbiológicas utilizando un instrumento B 9 2 4 0. Al igual que durante el almacenamiento, la córnea se vuelve más gruesa de lo habitual necesario para el trasplante. Los bancos de ojos utilizan agentes hinchantes D para reducir el grosor 6%Dextron T 500 se utiliza para devolver la córnea a su tamaño y medio de transporte normales.

Limpie los instrumentos estériles con la aplicación ARN para crear un entorno libre de AR antes de la escisión de la retina. Prepare el campo estéril y asegúrese de que el globo ocular esté intacto y solo se extraiga la córnea y el borde escleral. Si el cuerpo vítreo del gerus está secretando, se vuelve difícil eliminar el tejido de la retina.

Si el donante tiene menos de 65 años, la esclerótica se conserva con menos de 70% de alcohol para fines quirúrgicos después de las pruebas serológicas. En tales casos, la esclerótica no se corta, solo se extrae el cuerpo vítreo y se conserva toda la esclerótica para la escisión de la retina. Comience con un pequeño corte o incisión cerca del lado corneal de la esclerótica, avanzando hacia el nervio óptico con pinzas y tijeras estériles.

Sujetar la parte de la esclerótica con pinzas estériles y cortar con las tijeras directamente hacia el nervio óptico parte por parte, evitando daños en el cuerpo vítreo. Los tapones coroideos deben estar separados de la esclerótica, ya que están pegados. Corta toda la esclerótica para exponer el tejido coroideo. ¿Qué?

Una vez que la esclerótica esté completamente cortada, separe la esclerótica con los tejidos restantes cortándola cerca del nervio óptico, ahora será visible una capa completa de coroides que cubre el cuerpo vítreo. Llene estos tubos de ARN estériles con dos ml de RL y luego use dos pinzas estériles. Retire la capa de coroides suavemente levantando el nervio óptico con un par de pinzas y retirando la coroides con el otro.

Separa parcialmente la coroides y córtala para facilitar la extracción. La capa poide se podía cortar con unas tijeras evitando daños en la retina. Coloque la capa coroidea extirpada dentro de la solución posterior de ARN y consérvela a cuatro grados centígrados durante 24 horas.

Retire toda la coroides adicional para exponer el tejido de la retina. Una vez que se extirpa toda la capa de coroides, se verá una capa transparente de retina. Claramente, la capa coroidea tiene una membrana brus interior, que también podría eliminarse, pero es difícil identificarla a simple vista.

Del mismo modo, use dos pinzas para quitar la capa de la retina. Es fácil aislar una gran cantidad de retina si se extirpa cerca del nervio óptico. Ahora se podían ver todas las capas del ojo.

Coloque la retina excise dentro de la solución posterior de ARN y consérvela a cuatro grados centígrados durante 24 horas. Limpie el área de trabajo con alcohol de perfil de utilería ISO al 70%. Las células endoteliales se tiñen con disparo y azul se pueden ver con un aumento de cien x de un microscopio invertido.

Una córnea adecuada con más de 200 células por milímetro cuadrado generalmente se conserva para su uso posterior. Calificarlos de calidad regular a excelente ayudará para los estudios comparativos. Por lo general, una vez que la córnea está lista para el trasplante y se nota la transparencia, se utiliza una córnea adecuada para penetrar en la córnea donde se trasplanta toda la córnea.

La mortalidad celular se verifica mediante la observación de glóbulos azules teñidos y se clasifica en porcentaje de células muertas. La mortalidad celular global de más del 2% se considera inadecuada durante la preservación. Si la densidad celular es inferior a 2200 células por milímetro cuadrado o se daña debido a la mortalidad, la córnea podría utilizarse para la kerstie laminar anterior.

Si el traumatismo anterior está dañado y la córnea tiene una buena densidad de células endoteliales, la córnea podría utilizarse para la kerstie laminar posterior. El grosor de la córnea suele aumentar durante el cultivo de órganos. El medio de transporte ayuda a recuperar su forma y estructura normales.

Además, el cultivo de órganos ayuda a la reepitelización de la córnea y, debido a su largo período de almacenamiento, ayuda a una adecuada selección del donante. Pruebas microbiológicas y serológicas. Da tiempo suficiente para organizar una cirugía y ayuda a comprobar la densidad y morfología de las células endoteliales cuando no es posible debido al alto tiempo postmortem.

Por lo tanto, si se sigue el procedimiento descrito, las córneas podrían extirparse sin dañar otros tejidos. Si la córnea no es apta para el trasplante, la córnea podría utilizarse con fines de investigación para desarrollar nuevos medios y condiciones de conservación para estudiar las enfermedades de la superficie ocular, aislar las células madre limbales y estudiar el efecto de los fármacos en la córnea. En el caso de la retina, podemos evitar la contaminación cruzada de las muestras de ARN con tejidos centenarios y preservar la integridad del ARN, que es de fundamental importancia.

Estos tejidos, indispensables para la investigación, tienen como objetivo caracterizar el transcriptoma de los tejidos oculares, aislar células madre para proyectos de medicina regenerativa y evaluar las diferencias histológicas entre tejidos de sujetos normales o afectados. Una vez que se ha extraído el tejido de la retina, se puede utilizar para diferentes fines y, por lo tanto, los pasos y condiciones posteriores utilizados para la preservación pueden diferir en consecuencia. Por ejemplo, el tejido de la retina se puede colocar en tubos que contienen reactivos de estabilización de ARN como el rnator o el tampón thisis para la extracción de ARN o ADN, desplazado o tripsina para el aislamiento de células.

Fijación de soluciones antes de la inclusión de tejidos en parafina o OCT para inmunohistoquímica. Gracias por ver este video y buena suerte con tu investigación.