Métodos de ensayo a Drosophila Comportamiento

El objetivo general de este procedimiento es demostrar métodos para examinar los comportamientos motores, sensoriales y de coordinación de Drosophila. Esto se logra evaluando primero la función motora de la lava, utilizando el ensayo de gateo, evaluando la función motora del adulto, utilizando el ensayo del anillo y evaluando la coordinación y las habilidades sensoriales de los adultos con el ensayo de cortejo. En última instancia, este panel de ensayos conductuales puede mostrar cómo los factores genéticos y externos, como los tratamientos farmacológicos, pueden influir en la actividad y la coordinación.

Intra sophala. La principal ventaja de este ensayo sobre los métodos existentes, como el eje geográfico negativo, es que el ensayo en anillo es de mayor rendimiento y más sensible. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de las enfermedades neurodegenerativas, como la detección temprana de defectos del locomotor.

El Dr. Jamie Becknell, un postdoctorado de mi laboratorio, demostrará este ensayo. El ensayo de rastreo larvario se utiliza para medir el efecto de los factores genéticos y ambientales sobre la motilidad para comenzar a establecer un cruce de 10 a 15 machos y 10 a 15 vírgenes en una botella estándar. Después de 24 horas, los adultos sanos habrán puesto suficientes huevos para poblar el biberón y mantener a esa población envejecida durante 24 horas.

Limpie los adultos a una botella nueva y repita el proceso. Ahora incubar el biberón hasta que se observen larvas en el alimento del biberón. Agregue de 50 a 100 mililitros de sacarosa al 20% y déjelo reposar durante 20 minutos.

Las larvas flotarán hasta la parte superior, recogerán las larvas con una pipeta serológica de 25 mililitros con la punta cortada y las colocarán en una cesta de malla. Lave las larvas en la canasta de malla dos veces con agua desionizada. Ahora se puede experimentar con ellos.

Para tratar las larvas con un medicamento, use un cepillo para transportar el número deseado de larvas a un vaso de precipitados de cinco mililitros que contiene una solución de sacarosa al 5% y el medicamento de interés. Deje que se alimenten de la solución de azúcar drogada durante 15 minutos, luego viértalos nuevamente a través de la canasta de malla, enjuáguelos y proceda a medir el efecto del medicamento sobre la motilidad. Use un cepillo para transportar una lava individual a una placa de Petri de 15 centímetros que contiene 2%aros.

Colóquelo sobre una hoja de papel de injerto. Ahora recopile los datos. Basta con contar el número de líneas de cuadrícula que cruza la lava en un minuto.

A continuación, use el cepillo para transferir la lava al pozo de un plato de disección de vidrio que contiene una solución de pasta de levadura diluida bajo un microscopio de disección durante un período de un minuto, cuente las contracciones de Percys. Una sola contracción se cuenta como un movimiento completo posterior a anterior. Repita hasta que se haya contado el número deseado de larvas.

El protocolo de anillo mide la velocidad locomotora de los animales adultos, recoge las moscas macho adultas recién emergidas bajo anestesia ligera y las transfiere a un archivo estándar que contiene alimentos normales o drogados. Ponga aproximadamente 25 moscas por vial. Mantenga las moscas a temperatura ambiente durante dos o tres días para una recuperación completa de la anestesia y la acumulación de niveles de fármaco en estado estacionario.

A continuación, transfiera unas 25 moscas sin anestesia a viales de poliestireno con tapones moldeados y ensamble los viales en uno o más aparatos de anillo. Deje que las moscas descansen durante 15 a 20 minutos mientras alinea una cámara digital para fotografiar los viales desde una vista lateral, tenga un temporizador listo y configúrelo en la duración deseada para el ensayo. Por lo general, tres segundos para realizar el ensayo.

Sostenga el aparato de anillo con una mano sin molestar a las moscas y sostenga el temporizador de la cámara con la otra mano bruscamente. Toque el aparato en el banco tres veces para derribar las moscas y simultáneamente iniciar el temporizador de cuenta regresiva de la cámara. Repita el ensayo una vez por minuto hasta que se hayan realizado cinco o seis ensayos.

Es fundamental no reutilizar los viales de prueba de poliestireno después de que se hayan recopilado los conjuntos de datos iniciales. Porque las moscas nuevas colocadas en viales usados no treparán en la misma medida que las moscas colocadas en viales nuevos. Para recoger los datos mediante un visor de imágenes se puntúa la altura media, subiendo por los diferentes grupos.

Este ensayo requiere cruzamientos genéticos preparados en frascos que produzcan abundante progenie para recolectar moscas para el ensayo. A las pocas horas de la subjetiva del animal, al amanecer se limpian los biberones para recoger a todos los adultos a intervalos de tres o cuatro horas. Recolectar machos y hembras sexualmente ingenuos recién emergidos, alojar a los machos individualmente en viales o tubos con comida, alojar a las hembras en grupos de cinco a seis.

En recintos similares, se requiere el mismo número de machos y hembras para el ensayo. Después de aislar las moscas recolectadas durante cinco días, prepárese para cargarlas en una rueda de apareamiento y realizar el ensayo. A continuación, transfiera cuidadosamente una hembra y un macho a la cámara de una rueda de apareamiento bajo un microscopio de disección.

Observe a la pareja durante 10 minutos o hasta que copulen con éxito durante ese tiempo. Registre cuándo se observa por primera vez cada uno de los varios comportamientos. Registre cuándo el macho se vuelve por primera vez hacia la hembra.

Cuando el macho toca por primera vez a la hembra con su pata, cuando el macho se extiende y vibra por primera vez, un registro de alas cuando el macho lame por primera vez los genitales de la hembra registra cuando el macho primero enrosca su abdomen debajo de sí mismo. Registre cuándo el hombre intenta montar por primera vez el correo electrónico femenino. Por último, registre el tiempo total dedicado al comportamiento de cortejo hasta que se produce la cópula.

En el caso de los animales de tipo salvaje, esto es casi siempre dentro de cinco a 10 minutos, recopilando datos por tres parámetros diferentes. En primer lugar, la latencia de un comportamiento es el tiempo que tarda en observarse por primera vez. En segundo lugar, la frecuencia de un comportamiento es si se observa o no.

Y en tercer lugar, el índice de cortejo es el tiempo dedicado al cortejo dividido por el tiempo total y hasta la cópula en un experimento con animales. Albergando mutaciones en F-U-S-T-L-S se relacionó con una esclerosis lateral miotrófica. Los mutantes genéticos con un centro de inserción mostraron la mitad de la capacidad de rastreo de los controles de tipo salvaje y una mutación de cambio de sentido R 5 21 C redujo la velocidad de rastreo a solo un centímetro por minuto.

Las pruebas de anillo de moscas adultas jóvenes de tipo silvestre dieron como resultado una altura promedio, escalada entre tres y cinco centímetros durante un período de tiempo de tres segundos. En este ensayo, no se observó desensibilización, ya que hasta los cinco ensayos consecutivos espaciados por un minuto mientras se intentaba el ensayo en anillo. Es importante recordar que hay que ser lo más preciso posible con respecto al tiempo.

Una vez dominado, el ensayo de apiñamiento larvario se puede realizar en 30 a 40 minutos para observar 10 ensayos para un genotipo si se realiza correctamente. Después de ver este video, también debe tener una buena comprensión de cómo observar y calificar los comportamientos de cortejo en la mosca.