Name: Métodos de ensayo a Drosophila Comportamiento (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: Aprende métodos de ensayo del comportamiento en Drosophila para evaluar función motora, coordinación y habilidades sensoriales. Estas técnicas permiten estudiar factores genéticos y externos que influyen en la actividad.

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Nos gustaría dar las gracias a Astha Maltare para la generación de los datos se arrastran larvas. Nos gustaría agradecer al Dr. Nicolás Lanson Jr. para dar sus comentarios sobre el manuscrito. Este trabajo fue apoyado por el Centro Robert Packard para la ELA en la Universidad Johns Hopkins (para UBP) y la Asociación de Esclerosis Lateral Amiotrófica (UBP), y R01MH083689 de los Institutos Nacionales de Salud Mental (CDN).

A. Ensayo de larvas Crawling 1. Las larvas Colección <ol><li> Establecer una botella de 8 onzas de moscas (machos + 10-15 10-15 hembras). </li><li> Que las moscas ponen sus huevos durante 24 horas, luego de botella clara de las moscas. (Transferencia de los adultos en una nueva botella y repita si es necesario). </li><li> Incubar la botella durante 3-4 días, o hasta que las larvas son visibles. </li><li> Agregar 50 a 100 ml de sacarosa al 20% de la botella con las larvas y deje reposar durante 20 minutos. Las larvas flotan en la parte superior. </li><li> Recoger las larvas con una pipeta serológica de 25 ml con la punta cortada, y el lugar en una cesta de malla. </li><li> Lávese las larvas en la cesta de malla dos veces con agua desionizada H 2 O. Las larvas están listas para los experimentos. </li></ol> 2. Para el tratamiento de las larvas con las drogas <ol><li> Utilizar un pincel para transportar el número deseado de las larvas a un vaso de precipitados de 5 ml que contiene una solución de sacarosa al 5% + fármaco. </li><li> Que las larvas se alimentan por lo menos 15 minutos.</li><li> Vierta tratados con el fármaco larvas en una cesta de malla y enjuague. Ahora están listos para usar. </li></ol> 3. Ensayo de locomotora (medida de la distancia total recorrida o las contracciones de la pared corporal) <ol><li> Use un cepillo para el transporte de larvas de individuo a un: <ol><li> 15 cm de placa de Petri que contenía 2% de agarosa (previamente vertió y se deja endurecer) sobre papel milimetrado con un 0,2 cm 2 cuadrícula. <ol><li> Contar el número de líneas de la cuadrícula cruzado en 1 minuto. </li></ol></li><li> Bien de un plato de vidrio que contiene una disección solución de levadura pasta diluida. <ol><li> Cuente las contracciones peristalsis (anterior pleno movimiento posterior contracción = 1) en un minuto mientras se observa bajo un microscopio de disección. </li></ol></li></ol></li><li> Repita hasta que los números deseados de las larvas han sido contados. </li></ol> B. rápido iterativo geotaxis negativos (ARO) del Protocolo Este ensayo fue De originalmentedescrito por Gargano et al 5. <ol><li> Recoger las moscas recién emergidas adultos de sexo masculino menores de CO 2 anestesia ligera y el lugar en un alimento vial estándar que contiene (o comida + drogas). </li><li> Mantener a las moscas a temperatura ambiente (en la parte superior del banco. ~ 22 ° C) durante 2-3 días para permitir la recuperación de CO 2 (y la acumulación de los niveles del fármaco en estado estacionario en su caso). </li><li> Transferir aproximadamente 25 moscas sin anestesiar a viales de poliestireno preparadas. </li><li> Montar viales con moscas en el aparato de anillo (Figura 1). </li><li> Permita que las moscas se adapte al medio ambiente, sin ser molestado, durante 15-20 minutos. </li><li> En este lugar la cámara digital de tiempo ~ 1 m por delante del aparato (en una plataforma, si es necesario para alinear el centro de la lente a media altura de los viales), el enfoque y zoom con la cámara en el aparato, y establecer un temporizador para 3,0 segundos. </li><li> Con cuidado, sujete el aparato de anillo de modo que no con la mano izquierda a la disturb las moscas, y sostienen que el temporizador con la mano derecha. </li><li> Fuertemente toque el aparato hacia abajo sobre la superficie del banco de tres veces, asegurándose de que el grifo es lo suficientemente duro para tumbar todas las moscas a la parte inferior de los viales. </li><li> Simultáneamente con la terminación de la llave en tercer lugar, iniciar el temporizador de cuenta atrás de 3 segundos. </li><li> En tres segundos, tomar una fotografía. </li><li> Restablecer el temporizador de 1 minuto y comenzar. Durante este tiempo, reajustar la cámara y se centran en el aparato, y establecer otro canal del temporizador durante tres segundos. </li><li> Después de 1 minuto, repita los pasos 1.7-1.10 </li><li> Después de un total de 5-6 ensayos, subir imágenes a un ordenador y usar el visor de imágenes preferida para abrir y marcar la altura promedio subió para cada vial. </li><li> Realizar análisis estadístico de los diferentes grupos que comparan la altura media subió. </li></ol> C. El cortejo y apareamiento de ensayo <ol><li> A primera hora de la mañana, claros y productoras de botellas de FLIes para ser utilizado. </li><li> En el transcurso del día (cada 3-4 horas), recoger recién emergidas machos sexualmente ingenuos y mujeres: <ol><li> Coloque los hombres individualmente en frascos o tubos con el medio. </li><li> Coloque 5-6 hembras juntos por vial / tubo. </li><li> Aislar las moscas recolectadas a 25 ° C en 12 h luz / oscuridad durante 5 días. </li><li> Transferencia de una mujer dentro de la cámara de una rueda de apareamiento. </li><li> Transferencia de un macho en la cámara de una rueda de apareamiento. </li><li> Observar par bajo un microscopio de disección de los siguientes comportamientos: <ol><li> Orientación (los varones se orienta hacia la mujer) </li><li> Al tocar (el macho golpea a la hembra) </li><li> Canción del ala (el macho se extiende y hace vibrar un ala) </li><li> Licking (lame los varones los genitales femeninos) </li><li> Curling (el macho se curva su abdomen debajo de sí mismo) </li><li> Intento de cópula (Curling la actividad al intentar montar a la hembra) </li></ol></li></ol></li><li> Observe si hay una0 minutos o hasta que la copulación con éxito, teniendo en cuenta el momento en que cada comportamiento se produce (latencia), el tiempo total involucrado en el comportamiento de cortejo hasta la copulación (para calcular el índice de noviazgo), así como el número de pares que realizar con éxito un determinado comportamiento ( frecuencia). 100% de pares de tipo salvaje generalmente se aparean dentro de los 5 minutos. </li><li> Calcular un índice de cortejo (IC) al dividir el tiempo en el cortejo, dividido por el tiempo total hasta la cópula. Para los pares de tipo salvaje esto por lo general oscila entre 0.6-0.8. </li></ol> D. Representante Resultados Rastreo de ensayo Larva normal de tipo salvaje vagará ~ 3 cm / minuto, y exhibición del ~ 40-50 contracciones de la pared del cuerpo en un minuto. Recientemente hemos desarrollado un modelo de Drosophila FUS / TLS relacionada con la esclerosis lateral amiotrófica que muestra defecto de larvas arrastrándose, esperanza de vida reducida y adultos escalada deterioro 6. Nos centramos en la expresión of de tipo salvaje y formas mutantes de FUS / TLS para las neuronas motoras (OK-371-GAL4 conductor) y realizó un ensayo de rastreo de las larvas. Como se muestra a continuación, las larvas de tipo salvaje arrastran hasta 12 cm, mientras que la expresión de la FUS de tipo salvaje disminución de la capacidad de las larvas arrastrándose de unos 6 cm. Los animales que expresan la mutación R521C ALS causando en FUS / TLS demostrar un deterioro muy grave en su movimiento de rastreo (Figura 1), el rastreo sólo aproximadamente 1 cm por minuto. Geotaxis negativo del ensayo ANILLO Jóvenes de tipo salvaje moscas adultas deben tener una altura media de subida de ~ 4-5 cm en un período de tiempo de 3 segundos (el tiempo se puede ajustar de 3 segundos para dar cabida a diferentes cepas o los niveles de actividad para definir una altura promedio determinado para una determinada cepa / tratamiento). Las moscas que se mantienen en la parte inferior se le asigna un valor de 0. No se recomienda usar más de 25 moscas por vial, ya que entonces se hace difícil determinar la ubicación de cada individuo mosca para medir la altura. Ndesensibilización o se ha observado menos hasta los 6 ensayos consecutivos espaciados 1 minuto, aparte de que hemos empleado. Es crítico no reutilizar los viales de ensayo de poliestireno en este ensayo después de los conjuntos iniciales de datos son recogidos por moscas nuevas colocadas en viales utilizados no subirá a la misma medida en viales frescos. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig1.jpg" /> Figura 1. De instalación para el ensayo de ANILLO. La cámara digital se coloca aproximadamente 1 m por delante del aparato que contiene las moscas en los viales de poliestireno, el enfoque y zoom con la cámara en el aparato, y establecer un temporizador de 3.0 segundos. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig2.jpg" /> Datos de la figura 2. Representativos de la prueba de rastreo utilizando larvas moscas ectópica expresar UAS-FUS WT, y UAS-FUS R521C bajo el control de un controlador de la neurona motora (OK371-GAL4). <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt;

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<li>Johnson, O., Becnel, J., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+5-HT%282%29+and+5-HT%281A%29-like+receptors+differentially+modulate+aggressive+behaviors+in+Drosophila+melanoga-+ster%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Serotonin 5-HT(2) and 5-HT(1A)-like receptors differentially modulate aggressive behaviors in Drosophila melanoga- ster.</a> Neuroscience. 158 (2), 1292-1300 (2009).</li>
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<li>Greenspan, R. J., Ferveur, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Courtship+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Courtship in Drosophila.</a> Annu. Rev. Genet. 34, 205-232 (2000).</li>
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</ol>

No tenemos nada que revelar.

El comportamiento de Drosophila está estrechamente regulada por factores genéticos y ambientales. Nosotros, y otros, han utilizado previamente los ensayos descritos aquí para recoger datos para examinar los genes relacionados a volar a los comportamientos y las enfermedades neurodegenerativas humanas modeladas en Drosophila 5-19. Para la prueba de rastreo, la selección cuidadosa de 3 de las larvas es un paso crítico. Si el tratamiento con un fármaco, se tardará 10-15 minutos (o má...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Sacarosa </td><td> Fisher Scientific </td><td> S5-500 </td></tr><tr><td> Agarosa </td><td> Invitrogen </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> 6 oz botella de Drosophila </td><td> Genesee Científico </td><td> 32-130 </td></tr><tr><td> Paint Brush (# 1) </td><td> Ted Pella, Inc. </td><td> 11859 </td></tr><tr><td> Fly componentes de los alimentos </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Harina de maíz </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9109741 </td></tr><tr><td> Agar </td><td> Genesee Científico </td><td> 66-104 </td></tr><tr><td> Melaza </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9349176 </td></tr><tr><td> El ácido propiónico </td><td> Acros </td><td> 14930-0010 </td></tr><tr><td> Tegosept </td><td> Ápice </td><td> 20-258 </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> PescadorCientífico </td><td> BP2818-4 </td></tr><tr><td> Levadura </td><td> Genesee Científico </td><td> 62-107 </td></tr></tbody></table>

métodos de ensayo a drosophila comportamiento

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, la mosca de la fruta, se ha utilizado para estudiar los mecanismos moleculares de una amplia gama de enfermedades humanas tales como cáncer, enfermedades cardiovasculares y diversas enfermedades neurológicas 1. Hemos optimizado los ensayos de comportamiento simples y robustos para determinar la locomoción de larvas, la capacidad de escalada para adultos (ensayo anillo), y comportamientos de cortejo de Drosophila. Estos ensayos de comportamiento son ampliamente aplicables para el estudio del papel de los factores genéticos y ambientales en el comportamiento de la mosca. Capacidad de rastreo de las larvas puede utilizarse de manera fiable para determinar los cambios en las primeras etapas de las habilidades que se arrastran de las larvas de Drosophila y también para examinar el efecto de las drogas o los genes de enfermedades humanas (en moscas transgénicas) en su locomoción. El ensayo de rastreo de las larvas es más aplicable si la expresión o la supresión de un gen que causa la letalidad de la pupa o adulto, ya que estas moscas no sobreviven a la edad adulta que de otro modo podría ser evaluada. Este básico de unssay también puede ser utilizado en conjunción con la luz brillante o estrés adicionales para examinar las respuestas de comportamiento en larvas de Drosophila. El comportamiento de cortejo ha sido ampliamente utilizado para investigar las bases genéticas de la conducta sexual, y también se puede utilizar para examinar la actividad y la coordinación, así como el aprendizaje y la memoria. El comportamiento de cortejo de Drosophila implica el intercambio de diferentes estímulos sensoriales como visuales, auditivas, y las señales de quimiosensoriales entre hombres y mujeres que llevan a una compleja serie de conductas motoras bien caracterizados que culminaron en la cópula exitosa. Los ensayos tradicionales para adultos de escalada (geotaxis negativas) son el trabajo tedioso, intensiva, y requiere mucho tiempo, con una variación significativa entre los diferentes ensayos 2-4. El rápido iterativo geotaxis negativos (RING) ensayo de 5 tiene muchas ventajas sobre los protocolos más ampliamente utilizados, proporcionando un enfoque de rendimiento reproducible, sensible y de alta para cuantificar la locomotora de adultos y negativos b geotaxisehaviors. En el ensayo de ANILLO, varios genotipos o tratamientos de drogas se puede probar de forma simultánea con gran número de animales, con el enfoque de alto rendimiento por lo que es más susceptible para los experimentos de detección.

Drosophila melanogaster es un sistema de genética y de comportamiento modelo manejable que se ha utilizado para entender las bases moleculares y celulares de muchos procesos biológicos importantes para más de un siglo 1. Drosophila ha sido bien aprovechado para hacerse una idea de la base genética del comportamiento de las moscas.

Métodos de ensayo a Drosophila Comportamiento

Drosophila melanogaster, la mosca de la fruta, se ha utilizado para estudiar los mecanismos moleculares de una amplia gama de enfermedades humanas, tales como el cáncer, las enfermedades cardiovasculares...

El objetivo general de este procedimiento es demostrar métodos para examinar los comportamientos sensoriomotores y de coordinación de Drosophila. Esto se logra evaluando primero la función motora de las larvas mediante el ensayo de arrastre, evaluando la función motora de los adultos mediante el ensayo del anillo y evaluando las habilidades de coordinación y sensoriales de los adultos con el ensayo de cortejo. En última instancia, este conjunto de ensayos conductuales puede mostrar cómo factores genéticos y externos, como tratamientos con fármacos, pueden influir en la actividad y la coordinación. En intra sophala. La principal ventaja de este ensayo frente a métodos existentes como el eje geo negativo es que el ensayo de anillo tiene una mayor capacidad de procesamiento y es más sensible. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de las enfermedades neurodegenerativas, como la detección en etapas tempranas de defectos locomotores.Este ensayo será demostrado por la Dra. Jamie Becknell, posdoctorado en mi laboratorio. El ensayo de arrastre larval se utiliza para medir el efecto de factores genéticos y ambientales sobre la motilidad. Para comenzar, establezca u

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Investigación

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Neurociencia

Los ensayos para medir el comportamiento de las funciones del aparato locomotor, el aprendizaje y las habilidades de memoria...

Locomotor ensayo, aprendizaje, memoria y déficit en Drosophila Los modelos de neurodegeneración

La agresión es un comportamiento innato y la experiencia previa de lucha afecta a la estrategia de lucha y al resultado de las contiendas posteriores en moscas. Este video describe un ensayo utilizado para estudiar el comportamiento agresivo de Drosophila. El protocolo de ejemplo presenta el ensayo realizado en una configuración que elimina el manejo de moscas y, por lo tanto, reduce el estrés de los animales, que de otro modo afectaría el rendimiento de los sujetos.

Drosophila Ensayo de agresión: un método para probar la plasticidad del comportamiento en moscas

En este artículo de vídeo, se describe un ensayo automatizado para medir el efecto del hambre o la saciedad en el comportamiento de búsqueda de comida dependiente olfativo en la mosca adulta fruta Drosophila melanogaster.

Un ensayo de una sola mosca por el comportamiento de forrajeo en Drosophila

Aquí se describe un método para la medición rápida y exacta de funcionamiento de vuelo en Drosophila, lo que permite detección de alto rendimiento.

Un método mejorado para la rápida y precisa medición de rendimiento en vuelo<em&gt; Drosophila</em

Aquí, presentamos un protocolo para cuantificar la evitación de individuos estresados. Este paradigma es potente y fácil de usar y puede utilizarse para evaluar la influencia de los genes y el medio ambiente en un tipo de interacción social en Drosophila melanogaster.

Ensayo sencillo para cuantificación de Prevención Social en Drosophila melanogaster

Con el fin de identificar nuevas mutaciones que afectan a la mecanosensación, diseñamos un ensayo que mide la respuesta conductual a la estimulación táctil de las cerdas de mosca en clones mutantes generados por el método MARCM. La combinación de técnicas permite la identificación de mutaciones mecanosensibles que, de otro modo, serían letales.

Un ensayo de conducta para Mechanosensation de clones en MARCM-basa<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Describimos aquí una configuración conductual y un método de análisis de datos para analizar las respuestas olfativas de hasta 100 moscas del vinagre (Drosophila melanogaster). Este sistema puede ser utilizado con estímulos olfativos únicos o múltiples, y adaptable para la activación optogenética o el silenciamiento de subconjuntos neuronales.

Comportamientos olfativas ensayó mediante seguimiento informático de<em&gt; Drosophila</em&gt; En un olfatómetro de cuatro cuadrantes

El presente protocolo evalúa la actividad locomotora de Drosophila mediante el seguimiento y análisis del movimiento de las moscas en una arena hecha a mano utilizando el software de código abierto Fiji, compatible con plugins para segmentar píxeles de cada fotograma basado en grabación de vídeo de alta definición para calcular parámetros de velocidad, distancia, etc.

Una técnica simple para evaluar la actividad locomotora en Drosophila

El Trastorno del Espectro Autista (TEA) se asocia con un deterioro del comportamiento social y comunicativo y la aparición de comportamientos repetitivos. Para estudiar la interrelación entre los genes del TEA y los déficits conductuales en el modelo de Drosophila , en este artículo se describen cinco paradigmas conductuales para analizar el espaciamiento social, la agresión, el cortejo, el acicalamiento y el comportamiento de habituación.

Paradigmas para la evaluación conductual en el modelo de Drosophila del trastorno del espectro autista

El protocolo presenta un método rentable y de alto rendimiento para evaluar la neurotoxicidad en la mosca de la fruta a través de la cuantificación de la disfunción locomotora como alternativa a los modelos tradicionales de mamíferos. Su objetivo es evaluar los efectos neurotóxicos de compuestos farmacéuticos, agentes ambientales o modificaciones genéticas utilizando un modelo sensible, reproducible y éticamente favorable.

Análisis conductual de la disfunción locomotora en Drosophila melanogaster como lectura de la neurotoxicidad

Este protocolo proporciona un marco para evaluar los cambios conductuales inducidos por el estrés en Drosophila melanogaster. Combinar ensayos complementarios permite cuantificar la actividad, la exploración y la toma de decisiones para moscas individuales. El enfoque es flexible y puede adaptarse a una amplia gama de estudios que investiguen la biología del estrés, el metabolismo y la función neuroconductual.

Fenotipado conductual multimodal de estados depresivos inducidos por el estrés en Drosophila melanogaster

Aprende métodos de ensayo del comportamiento en Drosophila para evaluar función motora, coordinación y habilidades sensoriales. Estas técnicas permiten estudiar factores genéticos y externos que influyen en la actividad.

Métodos de ensayo a Drosophila Comportamiento

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